[发明专利]一种IL1α启动子驱动荧光蛋白表达的永生化SASP细胞模型

权利要求书

1.一种衰老相关分泌表型(Senescence-associated secretory phenotype，SASP)细胞模型，其特征在于，所述细胞模型的基因组整合有IL1α启动子及受其调控的下游荧光蛋白，所述细胞模型经诱导后出现细胞衰老和典型的SASP，所述细胞为A375细胞；所述IL1α启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的细胞模型，其特征在于，所述荧光蛋白为下述任意一种：RFP、GFP、EGFP、YFP、EYFP、EBFP、BFP，所述荧光蛋白能够用于示踪且在激发光下产生荧光。

3.根据权利要求1所述的细胞模型，其特征在于，所述诱导是通过添加诱导剂使所述细胞出现细胞衰老和典型的SASP；所述诱导剂为能够造成细胞DNA损伤的理化因素或生物学因素。

4.根据权利要求3所述的细胞模型，其特征在于，所述诱导剂为下述任意一种或多种：顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、洛铂。

5.一种SASP细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)重组慢病毒载体构建：构建含IL1α启动子-荧光蛋白的重组慢病毒表达载体；所述IL1α启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)细胞感染：培养A375细胞，将所述重组慢病毒感染所述A375细胞；

(3)抗性筛选：使用嘌呤霉素进行抗性筛选，保留贴壁细胞，扩大培养，获得候选细胞模型；

(4)诱导：在所述候选细胞模型中添加诱导剂使诱导细胞出现衰老和典型的SASP；

(5)镜检：在荧光显微镜下观察；筛选可正常培养，无限增殖，衰老后会出现荧光蛋白表达的细胞，即为SASP细胞模型。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)具体为：根据查阅基因组序列，所述IL1α启动子的核苷酸序列，选择SEQ ID NO.1所示的序列；所述启动子下游荧光蛋白选择EGFP，将“IL1α启动子-EGFP”序列构建到慢病毒载体上。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)具体为：将步骤(1)构建好的慢病毒载体感染A375细胞12h，按24孔板每孔495μL培养基加5μL慢病毒的比例，再更换新鲜培养液继续培养至72h。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)具体为：步骤(2)感染结束后，保留贴壁细胞，加入3.0μM嘌呤霉素进行3天的抗性筛选，筛选结束后保留贴壁细胞，将筛选后的贴壁细胞消化下来，并在96孔板进行单克隆培养，再将单克隆细胞消化，于6孔板扩大培养，获得候选细胞模型。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)和(5)具体为：将候选的SASP细胞传代，每次传2个孔，一孔正常培养，另一孔用顺铂处理24h，然后更换新鲜培养基继续培养3-6天，期间每12h观察一次荧光，细胞出现荧光则为SASP细胞模型。

10.权利要求1-4任一项所述的细胞模型的应用，所述应用为如下任意一种：

在研究衰老机理和/或SASP发生、发展中的应用；或

在筛选和/或评价SASP抑制剂和激活剂中的应用；或

在评价SASP调节机制中的应用；或

在检测、鉴定和/或评价细胞衰老或SASP因子表达强度中的应用。