[发明专利]一种IL1α启动子驱动荧光蛋白表达的永生化SASP细胞模型

说明书

本发明提供一种IL1α启动子驱动荧光蛋白表达的永生化SASP细胞模型，可通过检测荧光直观判断SASP是否产生及其强度，该细胞可无限传代和扩增，在诱导衰老并出现典型SASP后，可表达荧光蛋白。该模型的特征在于，以黑色素瘤细胞为基础，在其基因组序列中插入新的“IL1α启动子‑荧光蛋白”序列。本发明的SASP细胞模型简单方便，省时省力，并可在不破坏细胞的情况下，了解SASP的发生和发展情况，特别适合大规模高通路筛选SASP抑制剂等，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种IL1α启动子驱动荧光蛋白表达的永生化SASP细胞模型及其应用。

背景技术

细胞衰老(senescence)是机体衰老(aging)的重要基础，也与多种老年性疾病密切关联。衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)是指衰老细胞经常出现的分泌功能亢进，其能分泌多种细胞因子，包括促炎症细胞因子、生长因子及蛋白酶等，这些统称为SASP因子。SASP因子参与许多病理过程和疾病发生过程，不少药物通过调节 SASP因子的表达而发挥治疗作用。探究SASP的发生机制，并发掘新的SASP抑制剂，是当前衰老研究领域的热点之一。

衰老也是肿瘤进展过程中的障碍，是机体对抗肿瘤的重要手段之一，衰老细胞可以通过 SASP改变细胞微环境，招募中性粒细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞到肿瘤病灶，从而杀死衰老细胞和肿瘤细胞。在研究衰老的发生机制，衰老与肿瘤细胞的关系，发觉新的 SASP抑制剂等，均需要建立体外细胞衰老模型，然而，目前这方面的研究寥寥无几，已建立的少数细胞衰老模型不能满足现有技术的快速发展的需求，如Kang C等[1]建立了可直接判断细胞衰老的可视模型，该模型用细胞衰老相关基因PmiR-146a的启动子为驱动基因，下游带绿色荧光蛋白GFP(green fluorescent protein)，转染人胚肺成纤维细胞IMR-90，但该模型只能用于判断IMR-90细胞是否衰老，不能反映SASP的情况，且该细胞不能无限增殖。王瑜等[2]利用紫杉醇(PTX)处理BGC823细胞构建衰老细胞模型并制备SASP-CM，该细胞模型虽然可以通过酶联免疫吸附实验检测SASP-CM中主要的SASP因子的浓度，但该细胞模型不具备可视化，需要进行酶联免疫吸附实验等手段进行检测，不能随时进行动态监测，更不能直观的反应SASP的发生和发展进程。另外，也有现有技术如WO2017032614、WO2013090645、WO2015116735等发现并能鉴定了选择性抑制SASP的化合物的方法，CN107531768发现威罗非尼引起SASP的激活，在基础状态下，黑色素瘤细胞A375表达细胞核IL1α，其在使用威罗非尼后不久下调。尽管该文献给出了A375是用于测试的候选，但其目的是利用A375来测试FOXO4DRI肽对转移性黑素瘤患者的治疗，并没有教导利用A375 作为研究或建立细胞衰老模型的技术启示。

由上可见，体外细胞衰老模型研究，尤其是SASP的细胞模型研究相对滞后，已然严重阻滞了相关领域药物的开发，以及探究衰老与肿瘤治疗的潜在可能性。因而建立适当的体外细胞衰老模型，尤其是建立可用显微镜观察SASP的细胞模型，是现有技术中亟需解决的技术难题，也是衰老相关领域的当务之急。但目前未见类似报道或产品。