[发明专利]一种多功能外壳材料PMTPH及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种多功能外壳材料PMTPH及其制备方法和用途，其由以下重量配比的原料制备而成：基质金属蛋白酶10～15份，甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺30～35份，羧基被活化后的透明质酸40～45份，氨基聚乙二醇马来酰亚胺3～8份，穿膜肽15～20份。该外壳材料与阳离子聚合物基因载体结合后，能使其带弱负电荷，通过静脉注射用于体内治疗；克服了现有阳离子聚合物基因载体进入血液后造成溶血等强毒副作用的问题。同时，该外壳材料不会降低阳离子聚合物基因载体的转染效率。该外壳材料没有免疫原性，安全性好；能对肿瘤微环境的酶敏感产生响应，利于肿瘤细胞吞噬；该外壳材料带有穿膜肽，利于携带基因进入细胞内。该外壳材料在制备用于体内治疗的基因载体中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种多功能外壳材料PMTPH及其制备方法和用途。

背景技术

基因治疗是指将治疗基因通过载体运送到靶器官或组织以修复受损或缺失基因，发挥治疗效果的一种新型疗法。目前基因治疗主要策略包括导入抑癌基因、自杀基因、siRNA、耐药基因、免疫基因、CRISPR-Cas9系统等外源性基因。但是外源性基因无法主动被靶细胞纳入，需要依靠基因载体运载进入细胞。因此，低毒性高效率的载体是基因治疗的关键。

目前广泛使用的基因载体主要分为病毒类载体和非病毒类载体。病毒类载体包括反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等，其基因转染效率高，但存在免疫原性和基因插入突变两个严重的安全性问题。近年来随着药剂学、材料学等多学科的迅速发展，大量合成材料及天然材料涌现，非病毒载体备受关注，包括阳离子脂质体或脂类复合物和阳离子高分子聚合物，它们作为载体的优点是，能够递送大尺寸的核酸；有明确的化学结构，易于商品化等。

但是，阳离子聚合物和基因结合后带有大量的正电荷，这些正电荷进入血液后会与血液中的负电蛋白结合，造成溶血等强毒副作用，因此，将其作为基因载体只能在体外进行细胞实验，不能静脉注射，用于体内基因治疗。材料用于体内的治疗，需要带一定的弱负电性或者中性，避免与血液中的负电蛋白结合，造成溶血等毒副作用。因此，研究一种低毒性高效率，且能用于体内治疗的基因载体对于促进基因治疗的发展有重要意义。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种多功能外壳材料PMTPH及其制备方法和用途。

本发明提供了一种多功能外壳材料PMTPH，它是由以下重量配比的原料制备而成：基质金属蛋白酶10～15份，甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺30～35份，羧基被活化后的透明质酸40～45份，氨基聚乙二醇马来酰亚胺3～8份，穿膜肽15～20份。

进一步地，前述的多功能外壳材料PMTPH是由以下重量配比的原料制备而成：基质金属蛋白酶13.6份，甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺33.5份，羧基被活化后的透明质酸42.3份，氨基聚乙二醇马来酰亚胺6.7份，穿膜肽18.6份。

进一步地，所述基质金属蛋白酶为基质金属蛋白酶9；和/或，所述甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺的分子量为2000；和/或，所述氨基聚乙二醇马来酰亚胺的分子量为600；所述羧基被活化后的透明质酸为20％羧基被活化后的透明质酸；所述穿膜肽为穿膜肽Cys-TATs，其氨基酸序列为YGRKKRRQRRRC(SEQ ID NO.1)。

进一步地，所述羧基被活化后的透明质酸的制备方法为：

取透明质酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N羟基丁二酰亚胺，在MES缓冲液中活化反应，即得。

进一步地，所述透明质酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N羟基丁二酰亚胺的质量比为42～43:2～2.5:1.4；所述透明质酸和MES缓冲液的质量体积比为20～45:25(mg/mL)；和/或，所述活化反应的反应条件为室温中反应2h；