[发明专利]一种建立斑马鱼血管新生障碍模型的方法

权利要求书

1.一种建立斑马鱼血管新生障碍模型的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

（1）斑马鱼的饲养

斑马鱼在25～30℃循环水环境下生长；光暗比为14h:10h，PH值6.5～7.5，硬度6～8，胚胎通过自然交配获得，每次交配前一天2～3对，均令两只斑马鱼纯合子斑马鱼与一只野生型斑马鱼配对，平均每对获得100～150个胚胎，胚胎于26～29℃浓度的霍尔弗雷特溶液中培育；

（2）斑马鱼血管新生障碍模型的建立

从循环水饲养系统中取出健康性成熟的雄性转基因纯合子斑马鱼与雌性野生型斑马鱼放入同一产卵用的鱼缸内，雌雄鱼用挡板隔开；

所述的雄性转基因纯合子斑马鱼：雌性野生型斑马鱼=1:2；

2）过夜后于第二天上午9:00～10:00拆除挡板，使雄雌斑马鱼交配；

3）受精1小时后，收集受精卵，并将其转至6孔板中，12枚/孔；盖好6孔板盖板，在28.5±1.5℃培养箱汇中孵育，20hpf于解剖显微镜下去除绒毛膜；24hpf分组加药，正常对照组加入正常斑马鱼培养水，浓度为3mL含0.1% DMSO的培养水，培养48小时，血管新生障碍组加入辛伐他汀工作液，培养48小时；

4）72phf于正置荧光显微镜下观察斑马鱼躯干节间血管和背主动脉生长情况，拍照，对斑马鱼新生血管荧光图片进行量化分析；

（3）评价辛伐他汀对斑马鱼血管新生的影响

观察0.15μM和0.30μM的辛伐他汀对24～72 hpf斑马鱼血管新生的影响，与NC相比，0.15μm和0.30μm辛伐他汀均能显著抑制斑马鱼的血管新生，P0.01；0.15μM辛伐他汀的斑马鱼血管新生抑制率达到43.40±11.98%，选用0.15μM辛伐他汀作为抑制斑马鱼血管新生的造模药物。

2.根据权利要求1所述的建立斑马鱼血管新生障碍模型的方法，其特征在于，斑马鱼在28℃循环水环境下生长；光暗比为14h:10h，PH值6.5～7.5，硬度6～8，胚胎通过自然交配获得，每次交配前一天2～3对，均令两只斑马鱼纯合子斑马鱼与一只野生型斑马鱼配对，平均每对会获得100～150个胚胎，胚胎于28℃浓度的霍尔弗雷特溶液中培育。