[发明专利]一种与AS斑块炎症相关的miRNA标志物及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一种与AS斑块炎症相关的miRNA标志物，其特征在于，包括miR-195-3p、IL-1β,IL-6和TNF-α，其中，miR-195-3p：用于人的Human-NR_029712.1的核苷酸序列如SEQ：ID：NO：1所示；miR-195-3p：用于小鼠的mouse-NR_029581.1的核苷酸序列如SEQ：ID：NO：2所示；IL-1β：用于人的Human-NM_000576.2的核苷酸序列如SEQ：ID：NO：3所示；IL-1β：用于小鼠的mouse-NM_008361.4的核苷酸序列如SEQ：ID：NO：4所示；IL-6：用于人的Human-NM_000600.4的核苷酸序列如SEQ：ID：NO：5所示；IL-6：用于小鼠的mouse-NM_031168.2的核苷酸序列如SEQ：ID：NO：6所示；TNF-α：用于人的Human-NM_000594.3的核苷酸序列如SEQ：ID：NO：7所示；TNF-α：用于小鼠的(mouse-NM_013693.3的核苷酸序列如SEQ：ID：NO：8所示。

2.一种权利要求1所述与AS斑块炎症相关的miRNA标志物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)ApoE敲除小鼠对照组和实验组血管组织中候选miRNA的筛选；

(2)THP-1源性泡沫细胞中miR-195-3p的表达验证；

(3)miR-195-3p mimic和inhibitor转染细胞后培养上清及细胞中IL-1β,IL-6和TNF-α含量及表达改变；

(4)miR-195-3p过表达慢病毒注射后小鼠后IL-1β,IL-6和TNF-α在小鼠斑块组织巨噬细胞中的表达；

(5)miR-195-3p过表达慢病毒注射后小鼠后血清中IL-1β,IL-6和TNF-α的表达改变；

(6)小动物超声仪分析小鼠主动脉根部内膜的厚度和主动脉弓部血流量大小；

(7)小鼠血管大体及主动脉根部油红O染色观察显示miR-195-3p过表达慢病毒注射后斑块大小；

(8)分析比较动脉斑块炎症相关miRNA和炎症因子的表达改变，与小动物超声结果相比诊断AS的特异性、敏感性指标并进行评价。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，HMD中miR-195-3p表达明显降低，且炎症因子表达明显升高。

4.权利要求1所述与AS斑块炎症相关的miRNA标志物在制备诊断AS性疾病产品中的应用。