[发明专利]一种与AS斑块炎症相关的miRNA标志物及其筛选方法和应用

说明书

本发明公开了一种与AS斑块炎症相关的miRNA标志物及其筛选方法和应用，属于生物工程技术领域，以ApoE基因敲除小鼠和THP‑1源性泡沫细胞为研究对象，提取组织或细胞的RNA，筛选出与AS相关的基因，在细胞水平验证miR‑195‑3p和相关炎症因子IL‑1β,IL‑6和TNF‑α的表达变化，建立了由miR‑195‑3p、IL‑1β,IL‑6和TNF‑α四个因子组成的AS斑块炎症特异性疾病联合诊断方法。该方法简单可靠，取材方便，灵敏度和特异性均与影像学诊断的结果高度吻合，在AS性疾病的早期诊断与预后评估中具有极大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体地说，涉及一种特异性动脉粥样斑块炎症相关特异性miRNA的筛选及应用。

背景技术

动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是一种累及大动脉或中动脉的慢性炎症性疾病，是心血管疾病共同的病理基础。近年来，随着经济的发展和人们生活水平的提高，AS的发病率和死亡率越来越高，其发病年龄日趋年青化,且所致并发症已成为全球死亡的主要原因，被称为二十一世纪生命健康的“第一杀手”。AS的致病因素众多，主要有脂源性学说、致突变学说、损伤应答学说、受体缺失学说等，而损伤应答学说中的炎症学说受到广泛关注，随着研究工作的不断深入，炎症学说在AS中再一次被强调。AS过程中单核细胞向巨噬细胞的招募、归巢、迁移和分化，巨噬细胞吞噬脂质，分泌促炎细胞因子、酶和活性氧(ROS)等物质，都会导致细胞死亡，而这些死亡细胞反过来又促进炎性细胞释放，造成炎症反应的级联放大，这将进一步加速其他心血管疾病的进展。鉴于AS的复杂多变性，若能从炎症角度出发，寻找一种AS斑块相关的早期分子诊断标志物有助于提高AS诊断的敏感性和灵敏度，将成为未来临床上早预防、早发现AS的重要目标之一。

miRNAs是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其长度约为20～25个核苷酸。在miRNA 细胞核中，最初的编码基因转录产生长度约为300～1000个核苷酸pri-miRNA，核糖核酸酶Drosha复合物再对pri-miRNA进行剪切、加工后制成长度约70～90个核苷酸pre-miRNA。在细胞质中，Dicer酶会将pre-miRNA剪切，生成长约20～24个成熟核苷酸miRNA。在细胞质中，AGO(Argonaute)蛋白、成熟miRNA相结合，形成RISC(即沉默复合物)。此外，靶分子miRNA能够以依赖和非依赖种子序列的方式将碱基互补配对后与细胞质中靶mRNA的3’UTR结合，进而阻断mRNA的翻译或抑制蛋白质合成。miRNA几乎参与了所有真核生物生理过程，可通过在胞核、胞浆中发挥双重调控作用，有效对机体调控复杂性加以提示。同时，miRNA的异常表达与多种疾病的发生发展密切相关，如肿瘤，心血管疾病等。作为缺血性血管疾病发病的主要病理基础，具体哪些miRNA在AS斑块形成中发挥重要作用尚未可知，因此寻找AS斑块炎症相关的miRNA将在AS的早期诊断及预防中具有潜在的价值。

鉴于AS是一种复杂的不可逆性疾病，寻找AS的生物标志物逐渐成为近年来心血管领域研究者们所关注的新焦点。然而，这些标志物并非针对其不同的发病机制，且对于动脉粥样斑块炎症相关的生物标志物研究尚少，尤其是在动脉斑块中表达的特异性miRNA。因此，寻找一种与动脉斑块炎症相关的特异性miRNA，探讨有效的早期诊断和干预方法，有助于提出更多、更好的AS分子诊断策略。

发明内容

本发明的目的在于一种动脉斑块炎症相关的miRNA筛选及应用。该发明中组织标本来自于雄性ApoE基因敲除小鼠，细胞是THP-1源性泡沫细胞。