[发明专利]一种产蔗糖磷酸化酶的基因工程菌有效
| 申请号： | 201910755446.8 | 申请日： | 2019-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN110343654B | 公开（公告）日： | 2021-03-30 |
| 发明（设计）人： | 陈献忠;李晓玉;沈微 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N9/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蔗糖 磷酸化酶 基因工程 | ||
1.一种产蔗糖磷酸化酶的基因工程菌，其特征在于，是以大肠杆菌BL21（DE3）为宿主，以pET-28a为载体，将蔗糖磷酸化酶在大肠杆菌（
2.一种构建权利要求1所述基因工程菌的方法，其特征在于，是将SEQ ID NO.2所示基因与载体连接，转化至大肠杆菌中。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：扩增SEQ ID NO.2所示的基因，酶切后，连接到载体pET-28a上，获得重组质粒pET-28a-SPase，将重组质粒pET-28a-SPase转化表达宿主大肠杆菌BL21（DE3）细胞中，获得制备蔗糖磷酸化酶的基因工程菌。
4.一种产蔗糖磷酸化酶的方法，其特征在于，应用权利要求1所述的基因工程菌进行发酵。
5.如权利要求4所述方法，其特征在于，所述发酵中使用的培养基为TB培养基。
6.如权利要求4所述方法，其特征在于，所述方法是将权利要求1所述的基因工程菌单菌落接种于LB液体培养基中，于35-39℃，200-220 r/min培养8-12 h后获得种子液。
7.如权利要求6所述方法，其特征在于，将种子液按1-5%接种量接入到TB液体培养基中，于35-39℃，200-220 r/min培养至菌密度OD600达到0.5-0.7后，加入IPTG诱导剂于23-27℃，200-220 r/min诱导20-30 h后收集菌液，离心收集菌体，重悬后破碎菌体，离心收集上清，即为蔗糖磷酸化酶粗酶液。
8.权利要求1所述的基因工程菌在食品、化妆品或制药领域产蔗糖磷酸化酶中的应用。
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