[发明专利]一种阿维菌素菌种选育方法

权利要求书

1.一种阿维菌素菌种选育方法，包括步骤如下：

(1)平面培养：将冻存的阿维菌素孢子液用无菌水稀释得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液涂覆在平板培养基上，将平板培养基置于温度26-29℃的恒温条件下培养7-10天进行分离纯化，完成平面培养，

所述平板培养基按质量百分比计，由以下组分组成：无水葡糖糖1-5％、酵母浸粉0.1-0.5％、磷酸氢二钾0.05-0.5％、氯化钠0.3-1.5％、琼脂1-8％、余量为水；

(2)斜面培养：平面培养结束后在无菌室内挑选平板培养基上的阿维菌素单菌落，采用接种针将阿维菌素单菌落接种于斜面培养基上进行斜面培养；

(3)种子培养：将步骤(2)培养成熟的斜面菌种接于种子瓶培养基上，将种子瓶置于摇床上进行摇床培养，得到种子液；

(4)发酵培养：将种子液转接于发酵瓶培养基中，将发酵瓶置于摇床上进行摇床培养；

(5)单菌落效价测试：发酵培养结束后采用HPLC法测试单菌落效价，高效价者进行保种。

2.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，步骤(1)中，孢子悬浮液的浓度为10^-1～10^-6。

3.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，步骤(1)中，所述平板培养基按质量百分比计，由以下组分组成：无水葡糖糖1.5％、酵母浸粉0.25％、磷酸氢二钾0.1％、氯化钠0.6％、琼脂2％、余量为水，pH 7.2-7.4，121℃灭菌30min。

4.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，所述的酵母浸粉总氮质量分数为10.56～11.32％、氨基氮质量分数为5.06～5.28％，氯化物质量分数为0.2～0.4％，磷酸盐和碱性沉淀实验无沉淀出现，色泽呈亮黄色。

5.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的斜面培养为将斜面培养基置于温度26-29℃的恒温条件下培养4-6天，完成斜面培养。

6.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，步骤(2)中，所述斜面培养基按质量百分比计，由以下组分组成：

可溶性淀粉0.1％、酵母粉0.2％、麦芽提取物0.5％、六水合氯化钴0.001％、琼脂2％、余量为水，pH 7.2-7.4，121℃灭菌30min。

7.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，步骤(3)中，摇床转速230-260转/分，培养温度为26-29℃，培养时间为34-39h。

8.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，步骤(3)中，种子瓶培养基按质量百分比计，由以下组分组成：玉米淀粉2.5％、豆饼粉0.8％、花生饼粉1％、酵母粉0.5％、酵母膏0.5％、六水合氯化钴0.003％、淀粉酶0.067％、余量为水，pH 7.0-7.20，121℃灭菌30min。

9.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，步骤(4)中，摇床转速为230-260转/分，培养温度为26-29℃，培养时间为6-12天。

10.根据权利要求1所述的阿维菌素菌种选育方法，其特征在于，步骤(4)中，发酵瓶培养基按质量百分比计，由以下组分组成：玉米淀粉7％、豆饼粉0.8％、花生饼粉1％、酵母粉0.5％、酵母膏0.5％、玉米浆0.2％、六水合氯化钴0.003％、淀粉酶0.067％、余量为水，pH7.2-7.5，121℃灭菌30min。