[发明专利]一种用于湿疹治疗的外用药物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于湿疹治疗的外用药物，其特征在于，每10ml中包括以下物质成分：

间充质干细胞裂解液 5-10×10⁶个细胞的裂解成分；

胸腺素beta 4 0.1-1.5μg；

转化生长因子-β 0.05-1.0μg；

溶媒 补足至10ml。

2.根据权利要求1所述的一种用于湿疹治疗的外用药物，其特征在于，所述溶媒为生理盐水、复方电解质注射液或葡萄糖注射液中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的一种用于湿疹治疗的外用药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将间充质干细胞裂解液用溶媒重悬后形成细胞悬液，在细胞悬液中再依次加入胸腺素beta 4和转化生长因子-β，混合均匀。

4.根据权利要求3所述的一种用于湿疹治疗的外用药物的制备方法，其特征在于，所述的间充质干细胞裂解液的制备方法，包括以下步骤：

(1)从哺乳动物的脂肪组织、骨髓组织、皮肤组织中分别分离提纯出脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、皮肤间充质干细胞；将脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、皮肤间充质干细胞按1～2∶2～3∶1～2的比例混合，组成第一代混合细胞；

(2)将第一代混合细胞以密度为10000-12000个/cm²接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO₂浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第二代混合细胞；

(2)将第二代混合细胞以密度为10000-12000个/cm²接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO₂浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第三代混合细胞；

(3)将第三代混合细胞以密度为10000-12000个/cm²接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO₂浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第四代混合细胞，收集细胞的同时收集培养第四代上清液，将第四代上清液通过0.22μm过滤，并置于4℃的温度环境中保存备用；

(5)将第四代混合细胞以密度为10000-12000个/cm²接种到培养容器中，加入完全培养基，再按完全培养基体积加入0.1％的血清，摇匀后放入培养箱，在CO₂浓度为5％、湿度为90％、温度为37℃的条件下培养，每天观察细胞生长情况，每3天清洗换液一次，待细胞融合度达到80％-90％时收集细胞，得到第五代混合细胞，并将第五代混合细胞以1×10⁸个/mL收集冻存，收集细胞的同时收集培养第五代上清液，将第五代上清液通过0.22μm过滤，并置于4℃的温度环境中保存备用；

(6)将第五代混合细胞复苏，加完全培养基制成细胞悬液，细胞浓度调整为2～5×10⁷个/mL，将细胞悬液置于超声破碎容器中，放入0℃低温槽中进行超声破碎，超声破碎细胞后通过0.22μm过滤，去掉细胞碎片和未破碎的细胞，得到干细胞裂解因子，将干细胞裂解因子、第四代上清液、第五代上清液液按1∶1∶1混合，将混合液回温至常温，用碳酸氢钠调节PH值至7.5，再通过0.22μm过滤得到间充质干细胞裂解液，并置于4℃的温度环境中保存。

5.根据权利要求4所述的一种用于湿疹治疗的外用药物的制备方法，其特征在于，所述的完全培养基为用于间充质干细胞培养的无血清培养基；所述血清按照以下方法获得，将皮肤血放入离心管于4-8℃的环境中静置3小时后离心，取淡黄色上清液于4℃的条件保存备用。