[发明专利]一种去除百日咳组分菌毛蛋白2/3内毒素的方法

权利要求书

1.一种去除Fim2/3内毒素的方法，其特征在于，包括：

步骤1、将百日咳杆菌发酵培养后，离心收集菌体；

步骤2、所述菌体用含尿素的磷酸盐缓冲液抽提，离心收集上清液；

步骤3、步骤2上清液加入PEG-8000进行沉淀；沉淀使用磷酸盐缓冲液抽提，然后离心收集上清液，上清液再用硫酸铵进行沉淀；或

步骤2上清液加入硫酸铵进行沉淀；沉淀使用磷酸盐缓冲液抽提，然后离心收集上清液，上清液再用PEG-8000进行沉淀；

所述PEG-8000在上清液中的浓度为3-5%W/V，所述硫酸铵在上清液中的浓度为10-20%W/V；

步骤4、沉淀使用磷酸盐缓冲液抽提，然后离心收集上清液，获得Fim2/3粗提液；

步骤5、Fim2/3粗提液采用Q-Sepharose层析柱处理，使用PBS冲洗，除内毒素，使用含氯化钠的磷酸盐缓冲液洗脱出Fim2/3组分。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1为：

将百日咳杆菌菌种接种于包姜培养基培养，然后再传至活性碳琼脂培养基上培养，接着接种于百日咳液体综合培养基后，摇瓶培养，最后作为发酵罐种子进行发酵罐培养，收获的发酵液离心收集百日咳菌体。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2为所述菌体用尿素磷酸盐缓冲液抽提，离心收集上清液，加热处理，再离心收集上清液。

4.根据权利要求1或3所述方法，其特征在于，所述含尿素的磷酸盐缓冲液中尿素的浓度为2-6M。

5.根据权利要求1或3所述方法，其特征在于，所述抽提为在2-8℃下搅拌。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为pH7.0-7.5、0.01-0.05M的磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤5所述含氯化钠的磷酸盐缓冲液中氯化钠的浓度为0.1-0.3M。