[发明专利]监测mRNA Poly(A)尾长度的方法及应用

权利要求书

1.监测mRNA Poly(A)尾长度的方法在mRNA质量控制中的应用，其特征在于，所述方法包括：在mRNA加尾反应中，通过测定ATP消耗量和/或PPi生成量，得到mRNA Poly(A)尾长度；

所述mRNA Poly(A)尾长度=ATP消耗量/mRNA的反应浓度；

所述mRNA Poly(A)尾长度=PPi生成量/mRNA的反应浓度；

通过测定标准加尾反应中不同反应时间点的ATP消耗量，建立标准mRNA加尾长度和反应时间的标准曲线，利用所述标准曲线，在mRNA加尾反应中得到mRNA Poly(A)尾长度；

所述ATP消耗量的测定方法为：高效液相色谱法或凝胶电泳法；

在标准加尾反应中，所述标准mRNA的反应浓度为0.6µM；在标准加尾反应中，所述ATP的起始浓度为500µM；

所述mRNA Poly(A)尾是指真核生物的mRNA 3’末端都有由100~200个A组成的Poly（A）尾巴；

所述ATP消耗量=ATP的起始浓度×ATP消耗量百分比，所述ATP消耗量百分比=（C₀-C_t）/C₀，所述C₀为反应时间为0分钟时的ATP实时检测浓度，所述C_t为不同反应时间点的ATP实时检测浓度。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过测定标准加尾反应中不同时间点的PPi生成量，建立标准mRNA加尾长度和反应时间的标准曲线，利用所述标准曲线，在mRNA加尾反应中得到mRNA Poly(A)尾长度。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

（a）搭建标准mRNA的加尾反应，分别在0分钟、5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟和35分钟取样，终止加尾反应后测定ATP消耗量，得到ATP消耗量与时间的对应关系；

其中，ATP消耗量=ATP的起始浓度×ATP消耗量百分比；

所述ATP消耗量百分比=（C₀-C_t）/C₀；

所述C₀为反应时间为0分钟时的ATP实时检测浓度，所述C_t为不同反应时间点的ATP实时检测浓度；

（b）根据mRNA Poly(A)尾长度=ATP消耗量/mRNA的反应浓度，其中，ATP消耗量=ATP的起始浓度×ATP消耗量百分比，通过步骤（a）得到的ATP消耗量与时间的对应关系，建立标准mRNA加尾长度和反应时间的标准曲线；

（c）根据步骤（b）得到的标准mRNA加尾长度和反应时间的标准曲线，在mRNA加尾反应中，通过mRNA Poly(A)尾长度=（ATP的起始浓度×（C₀-C_t）/C₀）/mRNA的反应浓度监测mRNAPoly(A)尾长度。