[发明专利]监测mRNA Poly(A)尾长度的方法及应用

说明书

本发明提供了一种监测mRNA Poly(A)尾长度的方法及应用，涉及生物技术领域，本发明提供的监测mRNA Poly(A)尾长度的方法，包括在mRNA加尾反应中，测定ATP消耗量和/或PPi生成量得到mRNA Poly(A)加尾长度。该方法适用于任何类型的mRNA，普适性广，能够有效替代现有技术中所使用的毛细管电泳等复杂的检测方法而对mRNA加尾长度进行快速且有效的检测，使检测更加简单高效，并且，利用ATP的消耗量与mRNA加尾长度的关系监测mRNA Poly(A)尾长度，结果更直观、准确。同时，对ATP消耗量的检测无需昂贵的仪器，检测成本较低。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种监测mRNA Poly(A)尾长度的方法及应用。

背景技术

信使RNA（mRNA）是一种极具潜力的新治疗方案，在免疫学、肿瘤学和疫苗等领域都有广泛前景。mRNA包含着细胞制造蛋白质并将其送到身体各个部位的指令，因此mRNA作为药物使用可指导细胞内蛋白质表达或者细胞外蛋白分泌。有效的mRNA疗法需要将mRNA有效递送至患者体内并且在患者体内有效生成由该mRNA编码的蛋白。为了防止mRNA降解、增强其稳定性，通常在mRNA的3'端需要进行适当的加尾。因此，准确反映Poly(A)尾长度对于mRNA在生产过程中的质量控制十分重要。

传统的方法为通过电泳检测加尾前后mRNA分子量的变化来反映加尾长度，此方法耗时长并且成本高。目前还没有简单、快速并且实时监测的方法来控制mRNA生产过程中的加尾长度。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种监测mRNA Poly(A)尾长度的方法，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。

本发明的第二个目的在于提供上述一种监测mRNA Poly(A)尾长度的方法在mRNA质量控制中的应用。

本发明提供了一种监测mRNA Poly(A)尾长度的方法，所述方法包括：在mRNA加尾反应中，通过测定ATP消耗量和/或PPi生成量，得到mRNA Poly(A)尾长度；

所述mRNA Poly(A)尾长度=ATP消耗量/mRNA的反应浓度；

所述mRNA Poly(A)尾长度=PPi生成量/mRNA的反应浓度。

进一步地，通过测定标准加尾反应中不同反应时间点的ATP消耗量，建立标准mRNA加尾长度和反应时间的标准曲线，利用所述标准曲线，在mRNA加尾反应中得到mRNA Poly(A)尾长度；

优选地，通过测定标准加尾反应中不同时间点的PPi生成量，建立标准mRNA加尾长度和反应时间的标准曲线，利用所述标准曲线，在mRNA加尾反应中得到mRNA Poly(A)尾长度。

进一步地，ATP消耗量的测定方法包括：高效液相色谱法、凝胶电泳法、毛细管电泳法、分光光度法或生物发光法，优选为生物发光法。

进一步地，在标准加尾反应中，所述标准mRNA的反应浓度恒定；

优选地，在mRNA加尾反应中，所述mRNA的反应浓度恒定。

进一步地，在标准加尾反应中，所述标准mRNA的反应浓度为0.1µM-1µM，优选为0.2µM-0.8µM，更优选为0.6µM。

进一步地，在标准加尾反应中，所述ATP的起始浓度为50µM-5mM，优选为200µM-2mM，更优选为500µM。

进一步地，所述mRNA Poly(A)尾长度=ATP消耗量/mRNA的反应浓度，所述ATP消耗量=ATP的起始浓度×ATP消耗量百分比/mRNA的反应浓度。