[发明专利]UTX基因在制备预防或治疗血脂类疾病药物中的应用有效
申请号: | 201910761811.6 | 申请日: | 2019-08-16 |
公开(公告)号: | CN110368502B | 公开(公告)日: | 2023-06-06 |
发明(设计)人: | 季晨博;郭锡熔;陈玲;崔县伟;尤梁慧;仲红 | 申请(专利权)人: | 南京市妇幼保健院 |
主分类号: | A61K48/00 | 分类号: | A61K48/00;A61K38/17;A61P3/06;C12N15/861;C12N15/66;A01K67/027 |
代理公司: | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人: | 王艳 |
地址: | 210004 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | utx 基因 制备 预防 治疗 血脂 疾病 药物 中的 应用 | ||
1.UTX过表达腺病毒在制备预防或治疗血脂类疾病药物中的应用,其特征在于,所述UTX过表达腺病毒的制备方法,包括以下步骤:
1)cDNA的获得:抽提小鼠肝脏组织RNA及逆转录cDNA;
2)UTX基因的获得:以肝脏组织cDNA为模板PCR扩增UTX基因;
3)UTX腺病毒过表达载体的构建:将UTX基因克隆至pShuttle载体,限制性内切酶PmeI线性化后,与pAdEasy-1载体共转染至BJ5183菌中,筛选重组后的阳性质粒即得UTX腺病毒过表达载体;
4)将UTX腺病毒过表达载体转染至培养好的AD-293细胞中继续培养7-10天后弃去细胞培养液上清,收集细胞悬液于EP管中,反复于甲醇冰浴与水浴中冷冻/解冻,解冻后短暂震荡细胞以获取病毒。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述步骤2)中PCR扩增上游引物序列如SEQID NO:1所示, 所述下游引物如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述步骤4)中所述培养好的AD-293细胞为在37°C、5%CO2孵箱中按7-8×105/ml密度均匀接种于培养皿中,待细胞融合度达70-80%的AD-293细胞。
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