[发明专利]靶向CD3和CD20的双特异性抗体及其应用

说明书

本发明提供了抗CD3单链Fab分子和抗CD20单链Fab分子以及它们在制备双特异性抗体中的应用。本发明还提供了靶向CD3和CD20的双特异性抗体及其在制备用于治疗B细胞相关疾病的药物中的应用。

技术领域

本发明涉及抗CD3和抗CD20单链Fab分子，还涉及靶向CD3和CD20的双特异性抗体以及它们的应用。

背景技术

B细胞淋巴瘤是常见的血液系统疾病，分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，其病因未明，免疫缺陷和环境因素被认为是可能的发病因素。B细胞淋巴瘤的治疗和预后取决于淋巴瘤的具体类型以及分期分级。根据临床进展的不同，B细胞淋巴瘤分为惰性淋巴瘤和侵袭性淋巴瘤。惰性淋巴瘤通常发展缓慢，可保持多年疾病稳定及长期生存，但无法治愈；而侵袭性淋巴瘤通常需要立即进行紧急治疗。由于缺乏有效治疗药物，目前B淋巴细胞瘤的治疗效果并不理想。

CD3是与T细胞受体(T cell receptor，TCR)相连接的仅表达于T细胞表面的分化抗原，是T细胞活化所必需的分子。CD3包括ε、ζ、δ和γ四条链，功能性CD3则是由其中的二条链形成的二聚体。抗CD3抗体可以与T细胞表面的CD3相结合，产生类似 TCR-CD3分子的效应，从而激活T淋巴细胞。

CD20是B细胞标记物，表达于成熟和激活的B淋巴细胞，在B细胞非霍奇金淋巴瘤和其他B-细胞恶性肿瘤中广泛表达，但在前体B淋巴细胞、浆细胞和淋巴多能干细胞等细胞中不表达。此外，CD20抗原显露明显，易于识别且体内血清中无游离的 CD20存在。因此，CD20是良好的B淋巴细胞瘤的治疗靶点。

由于CD3和CD20是T淋巴细胞和B淋巴细胞的特异性靶点，具有良好的成药潜能，因此，已有多个研究团队已经或正在构建靶向CD3和CD20的双特异性抗体，部分已申请专利(例如CN104640881A和CN104558191A)，但由于分子结构和开发技术的限制，双特异性抗体通常存在表达量较低、重链错配、抗体和抗原的结合力下降、纯化工艺繁琐等方面的问题。

发明内容

在一方面，本发明提供了一种抗CD3单链Fab分子，其包括Fab轻链和Fab重链，所述Fab轻链的C末端通过连接肽与所述Fab重链的N末端连接，其中所述连接肽的长度为45至80个氨基酸。

在一些实施方案中，所述连接肽的长度为60个氨基酸。

在一些实施方案中，所述连接肽包括串联重复的GGGGS序列。

在一些实施方案中，所述抗CD3单链Fab分子包括与SEQ ID NO：6或9所示序列有至少90％一致性的氨基酸序列。

另一方面，本发明提供了一种抗CD20单链Fab分子，其包括Fab轻链和Fab重链，所述Fab轻链的C末端通过连接肽与所述Fab重链的N末端连接，其中所述连接肽的长度为45至80个氨基酸。

在一些实施方案中，所述连接肽的长度为60个氨基酸。

在一些实施方案中，所述连接肽包括串联重复的GGGGS序列。

在一些实施方案中，所述抗CD20单链Fab分子包括与SEQ ID NO：10所示序列有至少90％一致性的氨基酸序列。

另一方面，本发明提供了所述抗CD3单链Fab分子或所述抗CD20单链Fab分子用于制备双特异性抗体的用途。

另一方面，本发明提供了一种双特异性抗体，其包括结合CD3的第一部分和结合CD20的第二部分，其中所述第一部分为抗CD3单链Fab分子，所述抗CD3单链Fab 分子包括Fab轻链和Fab重链，所述Fab轻链的C末端通过长度为45至80个氨基酸的连接肽与所述Fab重链的N末端连接；所述第二部分包括抗CD20抗体的轻链和重链。

在一些实施方案中，所述连接肽的长度为60个氨基酸。