[发明专利]纯化的多亚型热休克蛋白/肽复合物多联肿瘤疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及纯化的多亚型热休克蛋白/肽复合物多联肿瘤疫苗及其制备方法。具体地，本发明提供了一种制备纯化的多亚型热休克蛋白/肽复合物多联肿瘤疫苗的方法，以及通过所述方法获得的纯化的多亚型热休克蛋白/肽复合物多联肿瘤疫苗。所述疫苗具有安全性好、免疫活性高的优点。

技术领域

本发明涉及疫苗，特别是针对治疗肿瘤组织的通过提取纯化不同亚型热休克蛋白/肽复合物，并按比例搭配而成的纯化的多亚型热休克蛋白/肽复合物多联肿瘤疫苗，属于蛋白质工程领域。本发明还涉及所述疫苗的制备方法。

背景技术

肿瘤免疫是以细胞免疫为主，因此肿瘤免疫学研究主要目的之一是寻求肿瘤特异性抗原，活化杀伤肿瘤细胞的特异性T淋巴细胞(CTL)，增强机体抗肿瘤排斥反应。目前肿瘤免疫治疗研究主要有以单克隆抗体、脂质体、低密度脂蛋白为载体，以化疗药物、生物素或放射性同位素偶联物作为弹头的导向治疗；将细胞因子基因、共刺激分子B7基因等导入肿瘤细胞株、淋巴细胞或成纤维细胞、骨髓造血干细胞，从而抑制肿瘤细胞生长和转移、激发机体免疫反应的基因治疗；直接以核酸免疫动物，使之在宿主细胞内表达目的抗原，引发特异性的体液免疫和细胞免疫的DNA疫苗；以及利用肿瘤细胞或病毒抗原区多肽加载体或佐剂免疫的肽疫苗等方法。近年来在肿瘤抗原分子和主要组织相容性复合物(MHC)抗原呈递研究方面有突破性进展，尤其是发现热休克蛋白(HSP)在抗原呈递和激活CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞方面有重要作用，为肿瘤的免疫治疗开辟了新的途径。

HSP是一类在生物进化中高度保守、广泛分布的蛋白质，根据其分子量大小可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60和HSP28等不同的亚型。HSP作为“分子伴侣”(moleculechaperone)，能够结合肿瘤抗原并发挥递呈抗原的作用，能与细胞中各种变性蛋白和短肽结合，尤其是在抗原呈递过程中会结合大量抗原性多肽，从而使其具有该细胞特有的抗原库。因此，从肿瘤中提取分离的热休克蛋白携带了广谱肿瘤抗原。携带肿瘤的动物在接种热休克蛋白/肽复合物疫苗后可以刺激自身机体中T淋巴细胞的增殖，并以特定的抗原依赖性方式激活机体自身的免疫系统以杀死肿瘤。在抗肿瘤的这一过程中，由热休克蛋白肿瘤疫苗产生的免疫原性归因于这些分子伴侣结合了肿瘤细胞内特殊的抗原性肽段，并将它们呈递给抗原呈递细胞(APC)，然后刺激CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的肿瘤杀伤作用。

从肿瘤中提取的分子伴侣/肽复合物(即HSP/肽复合物疫苗)在过去二十年中已经被深入研究，证明在治疗许多恶性疾病中是安全和有效的，能够针对患者肿瘤中表达的特殊抗原制备出个性化的HSP/肽复合物肿瘤疫苗。然而，当前技术中的个性化HSP/肽复合物疫苗以单一HSP为主要组成成分，尤其是以HSP70或Gp96为主的单一HSP疫苗。Gp96疫苗III期临床试验显示在广泛的治疗过程中单一的Gp96肿瘤疫苗发挥了一定的抗肿瘤作用，但在诱导免疫反应抗肿瘤方面的能力仍然需要进一步提高。

为了解决这一问题，近年来有些科研人员尝试使用混合的热休克蛋白/肽复合物疫苗来治疗肿瘤，但这些混合的热休克蛋白/肽复合物疫苗成分不明确，具有潜在的风险。

因此，本发明所要解决的技术问题是克服以往单一热休克蛋白/肽复合物疫苗在诱导免疫反应抗肿瘤方面的能力不足以及混合热休克蛋白成分不明确、安全隐患大，提供一种治疗活性高、安全性好的纯化的多亚型热休克蛋白/肽复合物多联肿瘤疫苗。

发明内容