[发明专利]IgM纯化方法有效
| 申请号： | 201910772305.7 | 申请日： | 2019-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN112409477B | 公开（公告）日： | 2022-11-08 |
| 发明（设计）人： | 柏艳辉;成谦;孙华坤;唐佳 | 申请（专利权）人： | 广东菲鹏生物有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/16 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 王焕 |
| 地址： | 523000 广东省东莞市松山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | igm 纯化 方法 | ||
1.一种IgM纯化方法，其特征在于，包括：
a. 提供包含IgM的样品；
b. 经至少一次蛋白质沉淀处理和至少一次蛋白质浓缩处理得到蛋白沉淀物；
c. 将所述蛋白沉淀物复溶，使用辛酸-硫酸铵法去除杂蛋白得到包含所述IgM的粗提物；
d. 经疏水层析处理，收集穿透物；
e. 经羟基磷酸石灰石层析，收集洗脱物；以及
f. 经俘获IgG的亲和层析树脂纯化处理，收集穿透物；
所述疏水层析所采用层析基质中的活性基团为苯基或丁基；
所述疏水层析分离所用的平衡与上样缓冲液中NaCl的浓度为500 mM ~ 2000mM；
所述疏水层析分离所用的平衡与上样缓冲液中包含PB/PBS，且缓冲液pH=7.0~9.0；
所述羟基磷酸石灰石层析的平衡与上样缓冲液的pH=7.0~9.0；
所述羟基磷酸石灰石层析的平衡与上样缓冲液中包含PB/PBS；
所述羟基磷酸石灰石层析的平衡与上样缓冲液中NaCl的浓度为500 mM ~ 2000mM；
所述俘获IgG的亲和层析树脂选自蛋白G树脂；
蛋白G层析所用的平衡与上样缓冲液的pH=7.0~9.0；
所述蛋白G层析所用的平衡与上样缓冲液包含PB/PBS；
所述蛋白G层析所用的平衡与上样缓冲液中NaCl的浓度为500 mM ~ 2000mM。
2.根据权利要求1所述的IgM纯化方法，其特征在于，所述疏水层析分离所用的平衡与上样缓冲液中PB/PBS的浓度≥20mM。
3.根据权利要求1所述的IgM纯化方法，其特征在于，所述羟基磷酸石灰石层析的平衡与上样缓冲液中PB/PBS的浓度为5-20mM。
4.根据权利要求1所述的IgM纯化方法，其特征在于，所述蛋白G层析所用的平衡与上样缓冲液中PB/PBS的浓度为20-50mM。
5.根据权利要求1所述的IgM纯化方法，其特征在于，所述蛋白质沉淀处理包括盐析法和/或醇析法处理。
6.根据权利要求1或5所述的IgM纯化方法，其特征在于，所述蛋白质沉淀处理包括硫酸铵沉淀法和/或聚乙二醇沉淀法处理。
7.根据权利要求1所述的IgM纯化方法，其特征在于，所述蛋白质浓缩处理为透析法处理。
8.根据权利要求1所述的IgM纯化方法，其特征在于，所述包含IgM的样品选自细胞培养物、腹水或血液提取物。
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