[发明专利]一种用于检测埃博拉病毒的引物组、组合物及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测埃博拉病毒的引物组，其特征在于，包括：

具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的正向引物和具有SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的反向引物；或，

具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的正向引物和具有SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的反向引物，所述正向引物和反向引物中的至少一种的核苷酸序列经过修饰，所述修饰的方法包括甲基化修饰，通过天然核苷类似物取代一个或多个天然核苷酸和核苷酸间的修饰，在核苷酸序列中或两端添加一个或多个核苷酸残基、基团的修饰，将核苷酸序列中的一个或多个核苷酸残基替换成其它的核苷酸残基的修饰。

2.一种检测埃博拉病毒的组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组，还包括靶点探针，所述靶点探针具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列，所述靶点探针的两个末端分别标记荧光基团和淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，还包括内标探针或者靶点探针的反向序列，所述内标探针具有SEQ ID NO.4所示核苷酸序列，所述内标探针的两个末端分别标记荧光基团和淬灭基团，所述靶点探针和内标探针的荧光基团不同。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述荧光基团包括FAM、ROX、CY5、HEX、JOE、CY3、NED、TAMRA、TAXAS、RED、VIC和TET；所述淬灭基团包括BHQ、TAMRA、MGB和DABCYL。

5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述靶点探针和内标探针的至少之一的核苷酸序列经过修饰，所述修饰的方法包括甲基化修饰，通过天然核苷类似物取代一个或多个天然核苷酸和核苷酸间的修饰，在核苷酸序列中或两端添加一个或多个核苷酸残基、基团的修饰，将核苷酸序列中的一个或多个核苷酸残基替换成其它的核苷酸残基的修饰。

6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述修饰的方法包括在核苷酸序列的一端或两端增加一个或多个碱基使其形成二级结构。

7.一种用于检测埃博拉病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述的组合物，还包括PCR缓冲液、Mn²⁺、dNTPs、TTH酶、UNG酶和核酸提取试剂。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述组合物、PCR缓冲液、Mn²⁺、dNTPs、TTH酶、UNG酶混合并加入无DNase和RNase纯化水成为PCR反应预混液，所述PCR反应预混液的配方如下：

PCR缓冲液25μL；

100mM dNTPs(ATCGU)0.13～1.35μL；

Mn²⁺；

50μM正向引物0.1～1.5μL；

50μM反向引物0.1～1.5μL；

50μM靶点探针0.05～1.5μL；

50μM内标探针0.05～1.5μL；

TTH酶0.5～1.5μL；

UNG酶0.02～0.5μL；

加入无DNase和RNase纯化水至终体积30μL。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂包括细胞裂解液450μL、磁珠蛋白酶混合液40μL、第一洗涤液500μL、第二洗涤液500μL和洗脱液30～150μL；

所述细胞裂解液包括2.5M异硫氰胍、10％曲拉通X100和15％异丙醇；

所述磁珠蛋白酶混合液包括超顺纳米磁性粒子、蛋白酶K、62.5copy/μL内标质粒和50％甘油；

所述第一洗涤液包括1M异硫氰酸胍和50％无水乙醇；

所述第二洗涤液包括TRIS/氯化钠和50％无水乙醇；

所述洗脱液为无DNase和RNase去离子水。