[发明专利]一种NMOSD动物模型构建方法

权利要求书

1.一种NMOSD动物模型构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、建立小鼠EAE模型，具体如下：

1)制备MOG抗原稀释液：称量适量MOG_35～55肽段冻干粉溶于磷酸盐缓冲液溶液中，使其浓度为2mg/ml；

2)制备完全弗氏佐剂：取适量不完全弗氏佐剂，加入灭活结核杆菌，使其浓度达到4mg/ml；

3)制备抗原乳剂：将MOG抗原稀释液与完全弗氏佐剂等体积混合，于冰上充分乳化至油包水状态，此时MOG_35～55浓度为1mg/ml，灭活结核杆菌浓度为2mg/ml；

4)制备EAE动物模型：麻醉小鼠，在小鼠背部分四点皮下注射抗原乳剂200μL，在免疫当天和48小时后每只小鼠腹腔注射百日咳毒素200ng；

S2、提取患者NMO-IgG及正常人血清补体；

S3、开放EAE模型小鼠血脑屏障：在小鼠EAE发病高峰期，麻醉小鼠，颅顶部脱毛；经小鼠尾静脉注射声诺维微泡，用低频聚焦超声探头经颅骨辐照小鼠头部，辐照时间为1分钟；其中经小鼠尾静脉注射声诺维微泡的剂量为0.2ml/25g；超声探头参数为：直径190mm，曲率半径150mm，最大压力幅度半值所形成焦斑的直径和长度分别是3和8mm；超声系统参数设定：频率1MHz，焦距2.5cm，辐射总时长为1分钟；

S4、向EAE模型小鼠注射人NMO-IgG及补体：每只EAE模型小鼠经辐照后立即通过尾静脉注射100μgNMO-IgG及100μl补体。

2.根据权利要求1所述的NMOSD动物模型构建方法，其特征在于，步骤S2中收集NMO-IgG强阳性的NMOSD患者的血浆，静置过夜后的血浆以1000转/分钟的速度离心10分钟，分离出上清液；利用IgG提纯试剂盒分离出NMO-IgG，具体操作为：将非IgG抗体性蛋白结合胶体和纯化缓冲液分别在室温下放置15分钟；摇匀含有非IgG抗体性蛋白结合胶体的瓶子，将100μL非IgG抗体性蛋白结合胶体加入离心管里的离心柱；用纯化缓冲液洗涤非IgG抗体性蛋白结合胶体两遍；取100μL患者血浆的上清液用300μL纯化缓冲液稀释后，加入到含有100μL非IgG抗体性蛋白结合胶体的离心柱里上下颠倒混匀15分钟，之后将离心柱以5000g离心10分钟，收集纯化的IgG。

3.根据权利要求1所述的NMOSD动物模型构建方法，其特征在于，步骤S2中正常人血清补体提取步骤为：收集正常人血浆后，室温静置30分钟，以1000转/分钟的速度离心10分钟，分离出上清液，其中富含有活性的补体成分。