[发明专利]一种NMOSD动物模型构建方法

说明书

本发明涉及动物模型技术领域，公开了一种NMOSD动物模型构建方法，包括制备小鼠EAE模型、提取人NMO‑IgG及补体、利用低频聚焦超声联合微泡技术开放血脑屏障，并注射人NMO‑IgG及补体，使NMO‑IgG通过血脑屏障进入中枢，建立视神经脊髓炎谱系疾病的动物模型。本发明通过采用视神经脊髓炎IgG抗体及补体免疫诱导，并通过物理方法无创、短暂、可逆性开放血脑屏障，使NMO‑IgG及补体可以进入动物中枢诱发视神经脊髓炎谱系疾病，从而建立视神经脊髓炎谱系疾病动物模型；与现有其他动物模型相比，本发明更好地模拟人类相关疾病的发病过程，更客观地反映了NMOSD的病理过程及病理特征，为相关的研究提供了新的研究平台。

技术领域

本发明涉及动物模型技术领域，具体涉及一种NMOSD动物模型构建方法。

背景技术

视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disease，NMOSD)是神经病学领域近十年来临床诊治更新和进展最迅速的疾病之一。NMOSD是一类视神经与脊髓同时或相继受累的急性或亚急性自身免疫性脱髓鞘疾病，以其致残率高、易复发、预后差等特点严重威胁人类的健康。NMOSD与视神经炎、多发性硬化(multiple sclerosis，MS)在临床症状、病程、累及的部位、实验室检查以及对各种治疗的反应性虽然各不相同，但却存在着极大的相似性、连续性和重叠性，仅依赖于以上特点很难将NMOSD和MS等疾病区分开。

2004年Lemmon和他的同事们首先描述视神经脊髓炎IgG抗体(NMO-IgG)为NMOSD的一个特异性自身抗体标记物，并以其作为标志，诊断NMOSD患者的敏感性和特异性分别达73％和91％，是NMOSD与MS区别的重要依据。进一步研究证实其靶抗原是位于星形胶质细胞足突上的水通道蛋白4(aquaporin4，AQP4)。目前已经有许多研究表明，NMO-IgG不但是NMOSD特异的血清生物学标记物，而且在NMOSD发病中具有重要作用。

到目前为止，国内外研究学者探索了很多NMO动物模型制作方法，总结主要有以下3种途径：由中枢神经系统髓鞘抗原肽诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis，EAE)模型、颅内注射抗体诱导的NMOSD模型、由AQP4反应性T细胞诱导的NMOSD模型。

1)由中枢神经系统髓鞘抗原肽诱导的EAE模型：该模型的缺点是需要较高剂量的NMOSD患者血清抗体(每只Lewis大鼠需10mg/天，C57/B6小鼠则需2mg/天)；虽然动物的血脑屏障被破坏，但浸润入中枢的T细胞极少，致病性有限，此模型难以模拟出NMOSD病程中视神经及脊髓易受累的疾病特点。

2)颅内注射抗体诱导的脱髓鞘模型：该模型易建立，评价指标易检测，一定程度上模拟了人NMOSD的特点，具有一定的研究价值。但该模型发病部位局限于注射区域，缺乏视神经及脊髓等好发部位的观察证据，此模型没能模拟出NMOSD病程中视神经及脊髓易受累的疾病特点。

3)由AQP4反应性T细胞诱导的NMOSD模型：此模型证实AQP4反应性T细胞导致行为障碍中枢少突胶质细胞损害的潜在作用，利于尝试针对AQP4抗原的特异性免疫治疗，但操作步骤较多，精细度要求较高，成功率较低。而且，很多NMOSD患者(约40％)在患病前已经存在自身免疫性疾病(系统性红斑狼疮、干燥综合征、重症肌无力、I型糖尿病)等，NMOSD患者体内存在多种特异性自身抗体，因此对于自身免疫的可能机制仍需进一步探索；目前约75％的NMOSD患者血清中可检测到AQP4抗体，仍有NMO患者血清AQP4抗体阴性，这提示NMO-IgG阳性与阴性患者可能具有不同的免疫遗传学背景或与不同的抗原靶标或者抗体检测不敏感等原因有关；不同AQP4分布、亚型及其膜结构是否影响其与NMO-IgG的结合程度等。因此，关于NMOSD与AQP4抗体关系的具体机制等问题仍需进一步挖掘。