[发明专利]一种适用于CHO细胞培养用无蛋白培养基及其培养方法在审
| 申请号： | 201910772584.7 | 申请日： | 2019-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN110484487A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 吴嵩山;高飞;叶于青 | 申请（专利权）人： | 安徽欣乐生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 33240 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 王桂名<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 谷氨酰胺 半胱氨酸 基础培养基 流加培养基 二肽 谷氨酰胺二肽 无蛋白培养基 谷胺酰胺 生长性能 细胞生长 培养基 水解 堆积 细胞 | ||
1.一种适用于CHO细胞培养用无蛋白培养基，其特征在于，所述培养基由基础培养基和流加培养基组成，所述基础培养基内不含有谷氨酰胺，且所述基础培养基内含有二肽形式的谷氨酰胺与半胱氨酸；所述流加培养基含有谷胺酰胺与半胱氨酸；
其中所述基础培养基内半胱氨酸的浓度在0.08-0.15g/L，二肽形式的谷氨酰胺的浓度在2.8-8.0mmol/L；
所述流加培养基中半胱氨酸的浓度在0.05-0.12g/L，谷氨酰胺的浓度在4.0-6.5mmol/L。
2.根据权利要求1所述的一种适用于CHO细胞培养用无蛋白培养基，其特征在于，所述二肽形式的谷氨酰胺包括甘氨酰谷氨酰胺或丙氨酰谷氨酰胺中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的一种适用于CHO细胞培养用无蛋白培养基，其特征在于，所述基础培养基内半胱氨酸的浓度在0.10-0.12g/L，二肽形式的谷氨酰胺的浓度在6.0-8.0mmol/L；
所述流加培养基中半胱氨酸的浓度在0.08-0.12g/L，谷氨酰胺的浓度在5.5-6.5mmol/L。
4.根据权利要求1所述的一种适用于CHO细胞培养用无蛋白培养基，其特征在于，所述基础培养基选自一下商用培养基：EX-CELL302 CHO Serum-Free Medium、EX-CELL325 PFCHO、EX-XELL CD Fusion、SFM4CHO、CDM4CHO、Hycell CHO Medium或CDM4Mab中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的一种适用于CHO细胞培养用无蛋白培养基，其特征在于，所述流加培养基采用培养基Feed A或Feed B中的一种或多种。
6.根据权利要求1或5所述的一种适用于CHO细胞培养用无蛋白培养基，其特征在于，所述流加培养基中添加有5.5-8.0mmol/L葡萄糖。
7.一种CHO细胞培养的培养方法，其特征在于，使用如权利要求1-5任一所述的无蛋白培养基对CHO细胞进行生产培养。
8.根据权利要求7所述的一种CHO细胞培养的培养方法，其特征在于，首先用所述基础培养基培养CHO细胞24h-48h，当细胞生长至2.5～3.0×106cells/ml时，开始补加流加培养基，进行流加培养，之后每隔48h-72h补加一次流加培养基。
9.根据权利要求8所述的一种CHO细胞培养的培养方法，其特征在于，所述流加培养基分3-5次进行补加，在流加培养过程中，控制葡萄糖浓度维持在2.5-3.0g/L，谷氨酰胺浓度在1.8-2.5mmol/L，半胱氨酸的浓度在0.03-0.05g/L。
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