[发明专利]一种促进青钱柳愈伤组织生长和次生代谢产物积累的培养方法

权利要求书

1.一种促进青钱柳愈伤组织生长和次生代谢产物积累的培养方法，其特征是，包括：

取材及消毒处理：选取当年生青钱柳半木质化带芽茎段和顶端小叶，并做消毒处理：

愈伤诱导培养：茎段、叶片于诱导培养基中培养30d后产生愈伤组织，培养条件为连续黑暗处理，培养温度设置于20℃；

愈伤增殖培养：愈伤组织每隔28d继代一次，将愈伤组织移至继代增殖培养基中进行继代增殖培养，用封口膜密封后放入培养室培养，培养条件为连续黑暗处理，培养温度设置于20℃；

所述诱导培养基为：3/4MS基本培养基中，添加1.5mg·L^-16-BA、0.05mg·L^-1 NAA、30~35g·L^-1蔗糖、7~7.2g·L^-1琼脂粉、100～200mg·L^-1抗褐化剂PVP，3/4MS基本培养基为除CaCl₂全量，其他大量元素为全量的3/4；

所述继代增殖培养基为：WPM基本培养基中，添加1.5mg·L^-16-BA、0.05mg·L^-1 NAA、30~35g·L^-1蔗糖、7~7.2g·L^-1琼脂粉、100～200mg·L^-1抗褐化剂PVP。

2.根据权利要求1所述的一种促进青钱柳愈伤组织生长和次生代谢产物积累的培养方法，其特征是，所述消毒处理的具体方法为：茎段和叶片先经1 ~ 2滴洗涤剂浸泡2min，流水冲洗1 ~ 2h；茎段在超净工作台上经75%酒精处理30s，随后流水冲洗干净，在5%次氯酸钠溶液中浸泡3 ~ 5min，流水冲洗干净备用；叶片在超净工作台上经75%酒精处理10s，随后流水冲洗干净，在5%次氯酸钠溶液中浸泡2 ~ 2.5min，流水冲洗干净备用。

3.根据权利要求1所述的一种促进青钱柳愈伤组织生长和次生代谢产物积累的培养方法，其特征是，所述叶片的消毒时间短于茎段，多次冲洗以洗脱消毒剂，茎段消毒后去除首尾两端，叶片消毒后于维管束处划痕。

4.根据权利要求1所述的一种促进青钱柳愈伤组织生长和次生代谢产物积累的培养方法，其特征是，所述取样时间为4月至9月；茎段取自青钱柳无病害枝条顶端1 ~ 2节；叶片取自青钱柳复叶上的顶端小叶。

5.根据权利要求1所述的一种促进青钱柳愈伤组织生长和次生代谢产物积累的培养方法，其特征是，所述诱导培养基或继代增殖培养基的pH为5.75～5.80。