[发明专利]一种运动神经元及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种制备运动神经元的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：多能干细胞向神经上皮细胞分化；

S2：神经上皮细胞向运动神经前体细胞分化；

S3：运动神经前体细胞向有丝分裂后运动神经元分化；

S4：有丝分裂后运动神经元向成熟运动神经元分化，即得到成熟的运动神经元；

所述S1包括：

S11：将人多能干细胞的上清液吸除，加入特异性分化培养基诱导分化，并向特异性分化培养基中加入BMP抑制剂、Nodal抑制剂和GSK-3抑制剂；

S12：每天更换培养基，培养4-5天；

所述S2包括：

S21：吸除神经上皮细胞的上清液，加入特异性分化培养基诱导分化，并向特异性分化培养基中加入RAR核受体激活剂和Sonic Hedgehog信号通路激活剂；

S22：每天更换培养基，培养4-5天；

在S22之后，还可包括步骤S23：将分化得到的运动神经前体细胞进行冻存；

所述S3包括：

S31：吸除运动神经前体细胞上清液，加入特异性分化培养基诱导分化，并向特异性分化培养基中加入γ分泌酶抑制剂；

S32：每天更换培养基，培养3-4天；

所述S4包括：

S41：吸除有丝分裂后运动神经元上清液，加入特异性分化培养基诱导分化，并向特异性分化培养基中加入相关分化因子；所述相关分化因子包括：BDNF、GDNF、IGF-1、dibutyryl-cAMP和维生素C；

S42：隔天更换培养基，培养20-25天；

所述运动神经元表达PAX6+、OLIG2+、HB9+、和ISL1+，还表达MAP2+、CHAT+、Synaptophysin+中的一种或任意组合。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1之前还包括步骤S0：多能干细胞的培养。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，BMP抑制剂、Nodal抑制剂和GSK-3抑制剂分别为LDN193189、SB431542和CHIR-99021。

4.一种细胞群，其特征在于，含有权利要求1-3中任意一项所述的方法制备而得的运动神经元。

5.一种治疗运动神经元病的药物，其特征在于，所述药物包含权利要求4所述的细胞群。