[发明专利]一种细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母工程菌、用途和催化剂

权利要求书

1.一种细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母工程菌，其特征在于，其构建过程包括以下步骤：

(1)获得成熟的果胶酶基因；

(2)连接成熟的果胶酶基因与酿酒酵母表面展示表达载体，得到重组载体；

(3)将步骤(2)得到的重组载体转化入宿主菌株酿酒酵母EBY100中，得到细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母工程菌。

2.根据权利要求1所述的一种细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述成熟的果胶酶基因选自黑曲霉SC323果胶酶基因pgaA。

3.根据权利要求2所述的一种细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述成熟的果胶酶基因的cDNA序列如SEQ ID NO:6所示。

4.根据权利要求2所述的一种细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述重组载体构建具体包括如下步骤：

(1)去掉成熟pgaA基因的信号肽序列和TAA终止子，将回收后的基因同pYD1载体质粒一起进行BamHI/EcoRI双酶切，然后用T4 DNA Ligase连接酶切后的pgaA基因和质粒pYD1；

(2)连接产物转化E.coli DH5α大肠杆菌，对转化子进行质粒提取获得阳性克隆子pYD1-PgaA质粒。

5.权利要求1-4任一项所述的的细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母工程菌在全细胞催化制备果胶酶的用途。

6.一种细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母全细胞催化剂，其特征在于，使用的酿酒酵母工程菌为权利要求1-4任一项所述的细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母工程菌。

7.根据权利要求6所述的一种细胞表面展示果胶酶的酿酒酵母全细胞催化剂，其特征在于，制备过程包括以下步骤：

(1)先将权利要求1-4中任意一项所述的工程菌接种至YPD液体培养基中培养，再以1％的接种量转接到新鲜MDL培养基中培养，然后离心得到菌体，菌体转入MDL培养基中培养，用半乳糖诱导产酶；

(2)收集发酵液，离心，取菌体沉淀，用双蒸水洗涤，加保护剂，通过真空冷冻干燥得到全细胞催化剂干粉。