[发明专利]基于拉曼光谱的非洲猪瘟病毒定性快检方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于拉曼光谱的非洲猪瘟病毒定性快检方法及试剂盒，所述定性快检方法包括以下步骤：(1)金纳米颗粒的制备；(2)报告探针HCR扩增；(3)拉曼染料和报告DNA功能化的金纳米颗粒的制备；(4)磁珠捕获系统制备；(5)质粒与报告系统的固定。本方法具有相对稳定的反应体系、较高的灵敏度以及大幅缩短的反应时间，整套针对病毒DNA的前处理过程可缩短至一个小时之内，操作简单，快速，成本低，具有较好特异性和灵敏度，是一个可应用与定性检测的非洲猪瘟快检方法。

技术领域

本发明涉及非洲猪瘟病毒检测技术领域，特别是涉及一种非洲猪瘟病毒定性快检方法。

背景技术

拉曼光谱基于光非弹性散射，通过分析分子的指纹图谱，进而能够有效地检测分子结构，分析物质组分。表面增强拉曼散射(Surface-enhanced Raman Scattering,SERS)是一种拉曼信号增强技术，采用贵金属纳米结构作为基底，由拉曼散射原理可知，当入射光照射到贵金属纳米颗粒基底时，金属纳米所带的电荷密度变高，形成较强的表面电磁场，使激光照射到金属基底表面或者颗粒缝隙间的拉曼散射信号得到增强，增强强度可达到10⁴-10⁷倍。与此同时，拉曼光谱还具有以下优越性：

(1)由于水的拉曼散射信号较弱，拉曼光谱可应用于水溶液中化学组分的检测。

(2)拉曼光谱可以同时覆盖50-4000波数区间，无需改变光栅，滤波器等光谱检测相关配件，可对无机物以及有机物进行分析。

(3)拉曼光谱峰清洗尖锐，可运用差异分析进行定性分析以及数据库搜索，应用拉曼光谱分析化学结构时，拉曼信号强度与相关化学键、分子振动及转动能级相关。

(4)拉曼检测所用激光光束束腰截面直径约为0.2-2mm，处于聚焦的激光光束截面的样品能被激光激发更强的拉曼光谱信号，因此处于光束截面的少量样品便可得到具有代表性的拉曼信号。此外，在检测痕量样品时，可使用显微拉曼进行检测，显微镜物镜可将激光束聚焦至直径为20μm的光斑甚至更小，从而要求的样品量更少。

目前表面增强拉曼普遍应用于无机物组分分析、珠宝玉石鉴定，由于其受生物样品荧光及水的干扰程度较弱，因此可应用于蛋白质、DNA、细胞组织等有机物小分子检测。

非洲猪瘟是一种高度传染性的猪病毒病，潜伏期5-15天，目前致死率接近100％。非洲猪瘟病毒具有复杂的流行病学背景，同时在自然界中存在多种宿主(蜱虫、野猪等)。非洲猪瘟病毒(Africa Swine Flu Virus，ASFV)的传播途径主要在于贸易流通、厨余喂养、宿主自然传播。

2018年非洲猪瘟在我国的首次发现，2018年8月在辽宁省一养殖户的生猪发生疑似非洲猪瘟疫情，存栏383头，发病47头，死亡47头，随后被确诊为非洲猪瘟基因II型。目前非洲猪瘟疫情在中国多省市自治区均有发生，据报道截至2019年1月13日共暴发疫情98起，发病猪超1万4千头，死亡超1万头，疫区生猪均遭扑杀，造成巨大经济损失和国民恐慌情绪。

目前，非洲猪瘟目前造成对中国畜牧业造成巨大损失，准确快速检测非洲猪瘟病毒的方法开发迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于拉曼光谱的非洲猪瘟病毒定性快检方法及试剂盒。