[发明专利]基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS检测方法

说明书

本发明提供一种基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC‑MSMS检测方法，属于兽药残留检测技术领域，通过在萃取池中分层加入样品、硅藻土和C18填料，实现ASE法能同步提取净化工作，简化实验方法；在此样品前处理技术的基础上，引入低温冷冻技术辅助ASE法对样品的净化效果，可有效去除复杂的生物基质(如极性脂肪)，显著减少基质效应，提高方法的灵敏度；结合UPLC‑MSMS，成功应用养殖鱼中多种磺胺类药物残留的检测，建立的方法检出限比现有标准方法显著减少至2～10倍。本发明检测方法简便、高效、灵敏度高、自动化程度高，适合大批量兽药检测样品的准确定性和定量分析检测。

技术领域

本发明属于兽药残留检测技术领域，具体涉及一种基于C18的ASE法建立养殖鱼中19种磺胺类残留的UPLC-MSMS检测方法。

背景技术

目前磺胺类残留是水产品中兽药残留的主要药物之一，因磺胺类抗生素可用于预防和治疗细菌感染性疾病，可有效干扰细菌酶系统对氨基苯甲酸的利用，进而影响细胞核蛋白质合成，起到抑制细菌的繁殖。目前关于磺胺类兽药残留的检测方法的报道有多种，且各自存在不同的优缺点。①根据磺胺结构中具有氨基的特性，药物可以采用荧光试剂进行衍生化，进而用荧光检测器(FLD)进行检测分析。②根据磺胺类兽药具有两性特性，可使用电化学检测器对目标物进行检测分析。Gonzalez等用乙酸乙酯-缓冲溶液混合液提取，硅胶柱净化后，用HPLC-电化学检测器测定了鲤鱼和鳟鱼不同部位中磺胺类残留量；2009年李存等建立了同时检测动物肌肉组织中7种磺胺类抗生素和甲氧苄啶的HPLC方法，动物组织样品经磷酸盐缓冲液提取后用HLB固相萃取柱净化处理，建立方法检出限可达5μg/Kg；但电化学检测稳定性差，因为电化学检测器中电极需要稳定时间较长，且样品基质复杂性也极易污染电极，限定了该方法的应用范围。③气相色谱串联质谱方法GC-MS是目前作为磺胺类兽药残留分析常用的确证方法，质谱检测一般采用电子轰击源EI进行检测分析，该方法能提供残留物的结构信息，且检测灵敏度高。2007年Lu等采用GC-MS方法测定了猪和牛的肌肉组织样品中的多种磺胺类药物残留，检测的离子为m/z 471，477；m/z 170，471，m/z 176，477。但在磺胺类检测分析中，样品需经过衍生化处理，去掉分子中的极性基团如氨基等，才可获得相应的测定结果，由此增加了检测方法难度，易使GC-MS法检测结果不稳定性。④目前利用大型精密度仪器如超高效液相色谱串联质谱仪已开始用于检测分析多种兽药残留物质。Huang等报道了经索氏萃取法提取牛奶中的磺胺类抗生素后再经超高液相色谱UPLC测定；胡海燕等利用UPLC法建立了猪肉和牛奶中10种磺胺类药物残留检测方法；2009年郭伟等先将采用改良的QuEChERS技术对样品进行提取和净化处理后，建立了UPLC-ESI-MS/MS检测分析牛乳中24种磺胺类药物多残留，其样品的平均回收率在64.25-110.9％之间，但该方法操作耗时长，不适合推广位日常残留监控。

快速溶剂萃取ASE技术已逐渐在环境、药物、食品和农业等领域内得到了广泛应用。2004年Yang等利用ASE技术检测磺胺和四环素残留物；2009年Lillenberg等先用磷酸盐和乙腈作为ASE提取溶剂，并加入柠檬酸作为改性剂，建立了污水中环丙沙星、诺氯沙星欧诺个氧氟沙星的检测方法；Draisci等利用ASE萃取牛肝中类固醇类药物，可提高其回收率(＞70％)；Pecorelli等用ASE方法提取了饲料中13种氟喹诺酮类药物，获得了较高的回收率。2007年Font等利用ASE，结合LC-MS建立了肌肉组织中几种磺胺类抗生素的检测方法；Carretero等将结合ASE和LC-MS/MS方法，建立了β-内酰胺类、林可胺类、大环内酯类、四环素类，硝基咪唑类和甲氧苄啶在肌肉残留的定量确证方法。由此可以看出ASE技术在应用兽药残留方面具有良好的应用前景，且ASE技术是结合提取、萃取和净化一体化性和自动化性，可有效提高兽药残检测分析效率。