[发明专利]细菌膜囊泡及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种生物颗粒组合物，其特征在于，由细菌的全菌体和从灭活细菌中分离的膜囊泡组成；所述细菌为革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌；所述细菌膜囊泡的制备方法如下：

1）膜囊泡增量

培养所述细菌至对数生长期，发酵，使菌体进一步富集；收集所述菌体，将所述菌体重悬后用电离射线辐照处理，所述电离射线辐照处理的方式为X-ray射线，辐照剂量为980-1000Gy，得所述灭活细菌，并且所述灭活细菌同未经电离射线辐照的细菌相比，所述灭活细菌的膜囊泡中核酸含量和蛋白质含量提升10-20倍；

2）分离纯化所述灭活细菌的膜囊泡，所述分离纯化的操作步骤包括：

i）将所述辐照处理后获得的灭活细菌的菌液离心并收集上清液，并将所述上清液用0.3-0.5μM滤器过滤去杂质；

ii）将过滤去杂质后的上清液用高速离心机离心，并除去沉淀，收集去除鞭毛的上清液；

iii）将去除鞭毛的上清液用超高速离心机离心，收集沉淀获得膜囊泡。

2.根据权利要求1所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌；所述革兰氏阴性菌为铜绿假单胞菌。

3.根据权利要求1所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述灭活细菌为厌氧菌。

4.根据权利要求1所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤i）中离心速率为100-10000g；离心时间为10-60min。

5.根据权利要求1所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤ii）中的所述高速离心速率为5000-25000g；离心时间为10-100min。

6.根据权利要求5所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤ii）中高速离心速率为10000-20000g；离心时间为30-60min。

7.根据权利要求1所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤iii）中所述的超高速离心速率为15000-150000g；离心时间为60-180min。

8.根据权利要求1所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤1)中所述对数生长期的细菌的OD600值为0.3-0.8。

9.根据权利要求8所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤1)中所述对数生长期的细菌的OD600值为0.5-0.7。

10.根据权利要求1所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤1)中用磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水重悬所述菌体。

11.根据权利要求1所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤1)中将所述菌体重悬至OD600值为20-80。

12.根据权利要求11所述的一种生物颗粒组合物，其特征在于，所述步骤1)中将所述菌体重悬至OD600值为40-60。

13.权利要求1所述的一种生物颗粒组合物在制备免疫原中的应用。

14.权利要求1所述的一种生物颗粒组合物在制备治疗细菌感染疾病的疫苗中的应用。

15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述细菌感染疾病包括肺炎、泌尿道感染、脑膜炎、败血症，或皮肤、软组织感染。

16.权利要求2所述的一种生物颗粒组合物在制备树突状细胞功能促进剂或成熟促进剂中的应用。

17.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述的一种生物颗粒组合物在制备促进骨髓来源的树突状细胞细表面分子CD80、CD86及MHCII分子显著上调的促进剂中的应用。

18.权利要求2所述的一种生物颗粒组合物联合树突细胞在制备CD+T细胞的增殖剂中的应用。