[发明专利]铜绿假单胞菌膜囊泡及其制备方法与应用

权利要求书

1.制备铜绿假单胞菌膜囊泡的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

培养细菌至对数生长期；

发酵，使菌体进一步富集；

收集菌体，将菌体用适量的磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水重悬并用低于灭活阙值的X-ray射线辐照处理，辐照剂量为980-1000Gy；

收集辐照处理后的菌液用离心机离心并收集上清液，上清液用0.3-0.5μM滤器过滤除菌；

将过滤后的上清液用高速离心机离心，收集上清液，去除鞭毛；

将去除鞭毛后的上清液用超高速机离心，沉淀即得所述膜囊泡；同未经X-ray射线辐照的细菌膜囊泡相比，所述膜囊泡中核酸的含量和蛋白质的含量提升10-20倍。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述对数生长期的细菌的OD600值为0.3-0.8。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所加磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的量与菌体总量的比例为每1ml溶液含有的菌量为OD600值20-80。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中的离心速率为100-10000g；离心时间为10-60min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中上清液用0.45μM滤器过滤除菌。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中的高速离心速率为5000-25000g；离心时间为10-100min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6)中的超高速离心速率为5000-150000g；离心时间为60-600min。

8.权利要求1-7所述的任一方法制得的铜绿假单胞菌膜囊泡。

9.一种提高铜绿假单胞菌膜囊泡内容物含量的方法，所述内容物包括核酸和蛋白质，其特征在于，所述方法采用辐照设备处理铜绿假单胞菌菌液，所述辐照设备的射线为X-ray射线，辐照剂量为980-1000Gy。

10.一种降低铜绿假单胞菌膜囊泡中内毒素含量的方法，其特征在于，所述方法采用辐照设备处理铜绿假单胞菌菌液，所述辐照设备的射线为X- ray射线，辐照剂量为980-1000Gy。

11.权利要求8所述的铜绿假单胞菌膜囊泡在制备抗细菌感染疫苗中的应用，其特征在于，所述铜绿假单胞菌膜囊泡可作为疫苗的佐剂使用。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述疫苗佐剂可以非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答。

13.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述细菌感染疾病包括肺炎、泌尿道感染、脑膜炎、败血症，或皮肤、软组织感染。

14.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述铜绿假单胞菌膜囊泡还可作为疫苗的载体应用。

15.权利要求8所述的铜绿假单胞菌膜囊泡在制备免疫原中的应用。

16.权利要求8所述的铜绿假单胞菌膜囊泡在制备DC细胞生长促进剂中的应用，其特征在于，所述铜绿假单胞菌膜囊泡能刺激DC细胞表面共刺激分子CD80、CD86和MHCII显著上调，促进DC细胞成熟和分化。

17.权利要求8所述的铜绿假单胞菌膜囊泡在制备DC细胞抗原递呈能力促进剂中的应用。

18.一种提升CD+T细胞增值的方法，其特征在于，将经过权利要求8所述的铜绿假单胞菌膜囊泡刺激并吞噬OVA抗原的DCs与CD4+T淋巴细胞在体外共培养。