[发明专利]一种阿尼芬净原料药细菌内毒素的检测方法

说明书

本发明涉及细菌内毒素的检测方法，具体的说是涉及一种阿尼芬净原料药细菌内毒素的检测方法。该方法将阿尼芬净原料药用四氢呋喃溶解，制成阿尼芬净初溶液,再用细菌内毒素检查用水稀释制成浓度为0.04mg/ml‑0.34mg/ml的阿尼芬净溶液，然后参照《中国药典》2015年版四部1143细菌内毒素检查法中的凝胶法检查，本发明提供的细菌内毒素检测方法，操作简便，灵敏准确，完全能满足阿尼芬净作为注射剂原料药检查细菌内毒素的要求，从而对原料药的质量进行控制，保证注射剂产品的安全性。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，涉及细菌内毒素的检查方法，具体的说是涉及一种阿尼芬净原料药细菌内毒素的检测方法。

背景技术

阿尼芬净为半合成的棘白菌素，具有抗真菌活性，能抑制真菌细胞壁中1,3-β-D-葡聚糖合成酶，从而抑制真菌中的主要成分1,3-β-D葡聚糖的合成。体外抗菌试验显示，本品具有抗白色念珠菌、光滑念珠菌、和热带念珠菌活性。能有效的对抗白色念珠菌感染。细菌内毒素是注射剂药品中的主要污染物质，大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”，危害人体健康，甚至危及生命，故注射剂质量标准中规定需要检查细菌内毒素。阿尼芬净作注射剂药物的原料时，应进行细菌内毒素的检查控制，为了临床安全用药，内毒素限值L控制在1.5EU/mg。阿尼芬净在水中不溶，按照《中国药典》2015年版四部1143细菌内毒素检查法常规方法不能进行检查，因此需要找到一种既能溶解样品，又能使供试品溶液不干扰内毒素检查的方法，满足阿尼芬净原料药的细菌内毒素检查需要。

发明内容

本发明目的在于提供一种阿尼芬净原料药细菌内毒素的检测方法，以解决现有技术存在的问题。

本发明为解决这一问题所采取的技术方案是:

一种阿尼芬净原料药细菌内毒素的检测方法，其特征在于该方法将阿尼芬净原料药用四氢呋喃溶解，制成阿尼芬净初溶液,再用细菌内毒素检查用水倍比稀释制备各灵敏度鲎试剂对应的阿尼芬净溶液，制成浓度为0.04mg/ml-0.34mg/ml的阿尼芬净溶液，然后参照《中国药典》2015年版四部1143细菌内毒素检查法中的凝胶法检查。

所述的阿尼芬净原料药细菌内毒素的检测方法，其特征在于所述四氢呋喃用经0.22μm的除菌滤膜过滤。

所述的阿尼芬净原料药细菌内毒素的检测方法，其特征在于所述阿尼芬净用四氢呋喃溶解制备初溶液，初溶液浓度为1.3mg/ml-11.0mg/ml，初溶液用检查用水倍比稀释32倍以上。

所述的阿尼芬净原料药细菌内毒素的检测方法，其特征在于该方法具体操作如下：

步骤一：阿尼芬净溶液制备:取阿尼芬净原料药，精密称定，加入经0.22μm的除菌滤膜过滤的四氢呋喃，使阿尼芬净充分溶解，制成浓度为1.3mg/ml-11.0mg/ml的溶液作为初溶液，用细菌内毒素检查用水倍比稀释32倍以上，制成浓度为0.04mg/ml-0.34mg/ml的阿尼芬净溶液；

步骤二：取灵敏度复核合格的λ为0.06 EU/ml -0.5 EU/ml的鲎试剂进行试验，每支鲎试剂用0.1ml检查用水复溶，8支试管，取2支加入0.1ml内毒素标准溶液（2λ），作为阳性对照，取2支加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照，2支加入0.1ml阿尼芬净溶液，2支加入0.1ml含2λ细菌内毒素的阿尼芬净溶液；

步骤三：轻轻混匀后封闭试管管口垂直放入36-38℃（37±1）℃的恒温箱内保温58-62分钟即(60±2)分钟，反应结束将试管从恒温箱中取出，缓缓倒转180°观察记录，试管内形成凝胶且不变形不从试管壁滑落者为阳性（用“+”表示），未形成凝胶或形成凝胶不坚实、变形并从试管壁滑落者为阴性（用“-” 表示）；