[发明专利]一种奶制品中呋喃四项检测样品的前处理方法

说明书

本发明公开了一种奶制品中呋喃四项检测样品的前处理方法，该方法包括以下步骤：步骤一、取样：将奶样于离心管中；步骤二、向样品中加入无水乙醇，混匀；步骤三、向样品中加入盐酸，再加入呋喃四项衍生化试剂，混匀；步骤四、在60‑90℃条件下水浴10‑30min；步骤五、加入磷酸氢二钾溶液，再加入氢氧化钠溶液，混匀；步骤六、加入乙酸乙酯，混匀后离心；步骤七、取上清液，空气或者氮气吹干；步骤八、吹干后加入正己烷，震荡充分溶解管壁内残留物；步骤九、向管内加入PBS，震荡后静置或者离心；步骤十、吸取下层液作为待测液；本发明大大减少了在奶样样品前处理时所产生的乳化现象，提高了样品的回收率，减少了处理样本时由乳化现象造成的不准确。

技术领域

本发明涉及奶制品样品处理技术领域，特别涉及一种奶制品中呋喃四项检测样品的前处理方法。

背景技术

硝基呋喃类药物常见的有以下4种：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林。硝基呋喃类物质均为性质稳定的黄色粉末，无味或味微苦。呋喃唑酮几乎不溶于水和乙醇，呋喃西林难溶于水，微溶于乙醇，呋喃妥因几乎不溶于水，微溶于乙醇。硝基呋喃类原型药在生物体内代谢迅速，其代谢产物分别为AOZ、AMOZ、AHD、SEM，和蛋白质结合而相当稳定，故常利用代谢物的检测来反应硝基呋喃类药物的残留状况。

研究表明，硝基呋喃类药物具有严重的致癌、致畸胎等毒副作用，1995年起欧盟禁止硝基呋喃类药物在畜禽及水产动物食品中使用，并严格执行对水产中硝基呋喃的残留检测，2002年美国亦随之制订相应法规。2002年12月24日发布的中华人民共和国农业部公告第235号及2005年10月28日发布的中华人民共和国农业部公告第560号，硝基呋喃类药物为在饲养过程中禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。鉴于此，2010年3月22日卫生部发布的《食品中可能违法添加的非食用物质名单(第四批)》中，明确将硝基呋喃类药物呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因列为非食用物质。

现有技术中存在以下缺陷：常规的呋喃四项样品处理方法在处理蛋白质与脂质较多的样品时易出现乳化现象，导致在加入乙酸乙酯并混匀后无法顺利分层，如图2所示，采用原始方法处理的样本，上层液与下层液分层不明显，乳化现象严重，上清液少，无法按规定方法进行上清液的吸取，影响实验结果。离心后上清液(乙酸乙酯层)呈果冻状，无法顺利吸取上清液，导致上清液吸取量减少，样本中待检成分回收率下降，无法准确检测样品。

发明内容

本发明的目的是提供一种奶制品中呋喃四项检测样品的前处理方法，本处理方法在样品前处理时可以有效避免乳化现象，使对被检测物质的回收率提高。

本发明是这样实现的，一种奶制品中呋喃四项检测样品的前处理方法，该方法包括以下步骤：

步骤一、取样：将奶样于离心管中；

步骤二、向样品中加入无水乙醇，混匀；

步骤三、向样品中加入盐酸，再加入呋喃四项衍生化试剂，混匀；

步骤四、在60-90℃条件下水浴10-30min；

步骤五、加入磷酸氢二钾溶液，再加入氢氧化钠溶液，混匀；

步骤六、加入乙酸乙酯，混匀后离心；

步骤七、取上清液，空气或者氮气吹干；

步骤八、吹干后加入正己烷，震荡充分溶解管壁内残留物；

步骤九、向管内加入PBS，震荡后静置或者离心；

步骤十、吸取下层液作为待测液。

本发明的进一步技术方案是：所述步骤一中的取3ml奶样于50mL离心管中。

本发明的进一步技术方案是：所述步骤二中向样品中加入3-5mL无水乙醇，混匀。