[发明专利]一种快速建立H9c2心肌细胞脂肪化模型的方法

说明书

本发明提出了一种快速建立H9c2心肌细胞脂肪化模型的方法，步骤如下：将复苏冻存的H9c2细胞采用DMEM高糖完全培养基，连续培养至3代；心肌细胞胰酶消化，DMEM高糖完全培养基终止消化，收集细胞悬液，离心，弃上层，加入DMEM高糖完全培养基，重新得到细胞悬液；细胞计数；细胞种板；配制脂性培养基，并将其加入到细胞种板中，培养24～48小时后，得到H9c2心肌细胞脂肪化模型。本发明的有益效果如下：操作容易，成脂效果好，成本较低，成模速度快，能够为今后深入研究动脉粥样硬化所引发的心血管疾病提供理论参考。

技术领域

本发明涉及细胞培养模型技术领域，特别是指一种快速建立H9c2心肌细胞脂肪化模型的方法。

背景技术

动脉粥样硬化是由血管内皮损伤和脂质沉积引发的慢性血管性炎症性疾病，与体内脂代谢异常密切相关。现已知动脉粥样硬化的病理过程非常复杂，其发病机制与脂质代谢、炎症反应、氧化应激、内皮损伤、细胞凋亡、细胞分子机制以及血流动力学改变等均有关。因此，对动脉粥样硬化的发病机制及病理过程进行深入探讨，指导临床心血管事件的治疗，控制AS发生和进展，降低ASCVD和ACS的发生率具有重大意义。

现已知脂质代谢异常与动脉粥样硬化斑块的发生与发展密切相关，对甘油三脂、胆固醇等脂质含量的检测在评价动脉粥样硬化危险程度中至关重要。如果能建立心肌细胞脂肪化模型，研究脂质沉积对心肌细胞引发的病理生理作用，对于后续在心血管领域内研究动脉粥样硬化的发生发展机制至关重要。

H9c2细胞作为心脏成肌性细胞，是一种广泛用来研究心血管疾病机制的细胞系，目前对H9c2心肌细胞的研究多数是通过建立缺氧损伤和氧化应激模型，来研究氧化应激信号通路对于心血管疾病发生发展机制的作用。而传统用于建立动脉粥样硬化细胞模型的细胞系以单核巨噬细胞为主，没有基于H9c2心肌细胞的脂肪化模型建立方法。因此，迫切需要一种采用H9c2心肌细胞建立脂肪化模型的方法，为今后研究脂质沉积对于心肌细胞的影响提供理论参考。

发明内容

本发明提出一种快速建立H9c2心肌细胞脂肪化模型的方法，解决了现有技术中该领域的制备方法空白问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种快速建立H9c2心肌细胞脂肪化模型的方法，其方法步骤如下：

(1)细胞获取：将复苏冻存的H9c2细胞作为P0代心肌细胞，采用DMEM高糖完全培养基，于37℃、5％CO₂环境中连续培养至3代后，得到P3代心肌细胞；

(2)细胞消化：将上述P3代心肌细胞采用0.5～1ml的胰酶消化1～2分钟，之后加入5～8ml的DMEM高糖完全培养基终止消化，然后收集细胞悬液至15ml的离心管，将所述离心管置于离心机中，于1000～1200rpm下离心5～8分钟，弃去上层清液后，加入1～2ml的DMEM高糖完全培养基，重新得到细胞悬液；

(3)细胞计数：将步骤(2)最终得到的细胞悬液进行充分吹打混匀，取10μl细胞悬液与10μl台盼蓝染色液进行混合，加入细胞计数板进行细胞计数；

(4)细胞种板：将步骤(2)最终得到的细胞悬液按照细胞计数结果分别接种于六孔板内，每孔细胞数为1*10⁵～5*10⁵个/ml，然后加入2ml的DMEM高糖完全培养基，混匀，于37℃、5％CO₂环境中培养24小时后，弃去上层培养液，得到种板；

(5)诱导细胞脂肪化：配制脂性培养基，并将其加入到步骤(4)中得到的种板中，培养24～48小时后，得到H9c2心肌细胞脂肪化模型。

作为优选，所述步骤(1)中每100mlDMEM高糖完全培养基中含有10ml的胎牛血清、4mmol的L-谷氨酰胺、10000U的青霉素以及10mg的链霉素。