[发明专利]一种氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法

权利要求书

1.一种氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)收集待测样本；

(2)分别配制内标试剂、提取试剂、衍生化试剂及中和试剂，备用；

(3)按一定比例将待测样本与所述内标试剂、所述提取试剂和溶剂混合均匀后，使其分层形成上层待测样本和下层待测样本；

(4)取部分所述下层待测样本进行高效液相色谱-串联质谱系统检测，获得所述氨基酸和酰基肉碱的定量结果；

(5)取部分所述上层待测样本，采用溶剂替换法将所述上层待测样本中的溶剂替换为所述衍生化试剂并混合均匀，进行衍生化反应；

(6)待衍生化反应结束后，加入所述中和试剂终止反应，并除去不溶物质；

(7)将(6)所得体系进行高效液相色谱-串联质谱系统检测，获得脂肪酸的定量结果。

2.如权利要求1所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，所述待测样本为待测血清。

3.如权利要求1所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，所述内标试剂的溶质包括D₃₉-二十烷酸、D_n-氨基酸混合物、D_n-肉碱混合物、D_n-肉碱混合物、¹³C₅,¹⁵N-脯氨酸、D₇-葡萄糖、D₃-肌酸酐和¹⁵N₂-尿酸中的至少一种；优选地，所述内标试剂的溶剂为甲酸和/或甲醇。

4.如权利要求1所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，所述提取试剂包括β-巯基乙醇、盐酸和甲醇中的至少一种；优选地，所述衍生化试剂包括盐酸和/或丁醇。

5.如权利要求1所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，所述中和试剂包括氢氧化钠、乙醇和水中的至少一种。

6.如权利要求1所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，所述溶剂为己烷。

7.如权利要求1所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，所述取部分所述下层待测样本进行高效液相色谱-串联质谱系统检测和所述取部分所述上层待测样本进行高效液相色谱-串联质谱系统检测，均包括如下步骤：

使用流动相试剂平衡高效液相色谱系统；

移除高效液相色谱系统中的色谱柱，将待测样本以流动注射进样的方式注入高效液相色谱系统中；

经高效液相色谱处理后的待测样本再进入串联质谱中进行检测分析。

8.如权利要求7所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，所述流动相试剂包括第一流动相试剂和第二流动相试剂；

所述第一流动相试剂为甲酸和甲酸铵的水溶液，所述第二流动相试剂为甲酸和甲酸铵的甲醇溶液；

当加入下层待测样品时，使用第一流动相试剂和第二流动相试剂的混合流动相试剂，其中所述第一流动相试剂与所述第二流动相试剂的体积比为(0.8～1.2):1；

当加入上层待测样品时，使用第二流动相试剂。

9.如权利要求1所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，通过所述高效液相色谱-串联质谱系统分别检测上层待测样品和下层待测样品的碎片离子丰度，然后参考内标获得氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量结果。

10.如权利要求1所述的氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，其特征在于，当检测下层待测样品时，所述高效液相色谱-串联质谱系统中的串联质谱系统使用电喷雾离子源；当检测上层待测样品时，所述串联质谱系统使用常压化学电离离子源。