[发明专利]一种氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法

说明书

本发明技术方案公开了一种氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，将待测样本与内标试剂、提取试剂和溶剂混合均匀后，使其分层形成上层待测样本和下层待测样本，通过高效液相色谱‑串联质谱系统并检测分别检测上、下层待测样本，从而获得氨基酸、酰基肉碱及脂肪酸类物质的半定量结果。采用本发明技术方案的检测方法可以实现高特异性地同步血清中氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸类物质。

技术领域

本发明属于化合物的分析技术领域，具体涉及一种氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法。

背景技术

血液由细胞和体液成分组成，细胞成分中包括红细胞、白细胞及血小板，体液为血浆(血清)包含有各种具有特殊功能的蛋白质及数目众多的小分子代谢产物。血液在体内循环往复，与人体各组织相互依存、相互影响，能够反映体内生理病理的代谢变化，通对这些代谢产物的检测与分析，了解之间的细微差别、特征及伴随现象，就能够为我们提供重要的线索或实验依据。氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸是血液中重要的代谢产物。

目前，由于这三种代谢产物各自都有繁多的小分子代谢物，即使使用高效液相色谱-质谱进行分析，也很难做到在一个血清样品中同时高特异性地检出这三种代谢产物中的各种代谢物。因此，往往需要多血清样品来进行这些指标的检测。

因此，在保证特异性和半定量分析的前提下，如何使用少量的血清样本，又同时检测其中氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的含量，是亟待解决的难点问题。

发明内容

本发明技术方案要解决的技术问题是现有的检测方法无法同时高特异性地检测血清中氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸。

为解决上述技术问题，本发明技术方案提供一种氨基酸、酰基肉碱和脂肪酸的半定量分析方法，包括如下步骤：

(1)收集待测样本；

(2)分别配制内标试剂、提取试剂、衍生化试剂及中和试剂，备用；

(3)按一定比例将所述待测样本与所述内标试剂、所述提取试剂和溶剂混合均匀后，使其分层形成上层待测样本和下层待测样本；

(4)取部分所述下层待测样本进行高效液相色谱-串联质谱系统检测，获得氨基酸和酰基肉碱的定量结果；

(5)取部分所述上层待测样本，采用溶剂替换法将所述上层待测样本中的溶剂替换为所述衍生化试剂并混合均匀，进行衍生化反应；

(6)待衍生化反应结束后，加入所述中和试剂终止反应，并除去不溶物质；

(7)将(6)所得体系进行所述高效液相色谱-串联质谱系统检测，获得脂肪酸的定量结果。

优选地，所述待测样本为待测血清；所述待测血清可以从血液样本中获得。

优选地，所述内标试剂的溶质包括D₃₉-二十烷酸、D_n-氨基酸混合物、D_n-肉碱混合物、D_n-肉碱混合物、¹³C₅,¹⁵N-脯氨酸、D₇-葡萄糖、D₃-肌酸酐和¹⁵N₂-尿酸中的至少一种。

优选地，所述内标试剂的溶剂为甲酸和/或甲醇。

优选地，提取试剂包括β-巯基乙醇、盐酸和甲醇中的至少一种。

优选地，所述衍生化试剂包括盐酸和/或丁醇。

进一步优选地，所述衍生化试剂包括盐酸和丁醇，且体积比为1:(10～20)，更为优选地，体积比为1:19。

优选地，所述衍生化反应的温度为95℃，时间为15min。