[发明专利]用于同步检测十种动物源成分的引物对、探针及方法

权利要求书

1.一种用于同步检测十种动物源成分的引物对与探针的组合物，其特征在于，用于同步检测十种动物源成分的引物对由下述序列组成：

检测驴成分特异的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

检测鸡成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

检测牛成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

检测鹿成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；

检测犬成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；

检测狐狸成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；

检测马成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示；

检测水貂成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.16所示；

检测猪成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.17所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.18所示；

检测羊成分的引物对，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.19所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.20所示；

所有下游引物的5’端标记生物素；

用于同步检测十种动物源成分的探针由下列序列组成：

检测驴成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.21所示；

检测鸡成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.22所示；

检测牛成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.23所示；

检测鹿成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.24所示；

检测犬成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.25所示；

检测狐狸成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.26所示；

检测马成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.27所示；

检测水貂成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.28所示；

检测猪成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.29所示；

检测羊成分的特异探针，核苷酸序列如SEQ ID No.30所示；

所有探针的5’端C12标记氨基。

2.一种用于同步检测十种动物源成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品的核酸提取；

(2)使用如权利要求1所述的引物对与探针的组合物中的引物对对样品核酸进行不对称多重PCR扩增；

(3)将如权利要求1所述的引物对与探针的组合物中的探针分别偶联到带有COOH的聚苯乙烯乳胶微球上；

(4)将步骤(3)得到的探针偶联后聚苯乙烯乳胶微球的与步骤(2)得到的不对称多重PCR扩增的产物进行杂交反应；

(5)完成杂交反应后，在每个杂交反应产物管中加入1×TMAC溶液，13000rpm离心4分钟，小心吸弃上清，收集微球沉淀，然后同样条件重复洗涤微球沉淀1-2次；

(6)用1×TMAC溶液将SAPE稀释至3.3μg/mL，制成TMAC-SAPE报告液；

(7)每管微球沉淀加入75μL的TMAC-SAPE报告液，振荡混匀，置恒温混匀仪，58℃温育6min，温育期间设振荡速度为300rpm；

(8)用液相芯片仪检测MFI值，根据检测的本底值，判定检测结果；

其中，所述本底值的设定：同步平行设定3个空白对照进行上述步骤(2)和步骤(3)的反应，其中所述空白对照为用水取代待测样品模板，其余试剂成分与反应条件不变；计算3个空白对照的MFI值的平均值，作为本底值；结果判定：当被检样品的MFI值大于5倍本底值时，判为阳性，否则判为阴性。