[发明专利]地中海弧菌烈性噬菌体vB_VmeM-Yong及其应用

说明书

本发明公开了一种地中海弧菌高效烈性噬菌体vB_VmeM‑Yong及其应用，涉及地中海弧菌污染和感染的生物处理。vB_VmeM‑Yong是首株以致病性地中海弧菌为靶标分离获得的噬菌体。vB_VmeM‑yong保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17098。vB_VmeM‑Yong可专一性裂解致病性地中海弧菌，潜伏期约为40min，裂解期为40min‑150min。vB_VmeM‑Yong的应用，用于特异性地抑制、杀死高致病性地中海弧菌。其对紫菜有明显的保护作用。

技术领域

本发明涉及一种病原菌的噬菌体，尤其是涉及一种地中海弧菌烈性噬菌体vB_VmeM-Yong及其应用。

背景技术

地中海弧菌(Vibrio mediterranei)属于弧菌科，弧菌属。弧菌属是弧菌科的一个主要类群，其成员广泛存在于海洋环境中，可分为致病性的或非致病性的。自1986年由Pujalte和Garay第一次描述地中海弧菌以来，该细菌已从各种海洋生物中分离出来，如植物、贝类、其他海洋无脊椎动物和来自不同地理区域的鱼类。地中海弧菌117-T6株就是从爆发黄斑病的条斑紫菜Pyropia yezoensis丝状体的典型患病样本中分离鉴定得到的，其可以导致多种紫菜丝状体呈现致死性黄斑病。在我国紫菜养殖有着多年的历史，大规模的紫菜生产集团也在形成，但是对紫菜病害的防治，特别是对紫菜危害最大的黄斑病没有有效的防治措施。严重影响了养殖户的经济收入和紫菜养殖业的健康持续发展。

噬菌体(phage)是感染细菌、真菌的病毒。裂解性噬菌体又可以称为烈性噬菌体或者毒性噬菌体(virulent phage)。裂解性噬菌体进入宿主菌体内后，开始了自己的生命循环，进行不断地复制、增殖得到大量的子代噬菌体，宿主菌被裂解。烈性噬菌体在抗菌药物研发方面具有巨大的潜力和优势。烈性噬菌体特异性侵染目标细菌，将其裂解，并且不感染人和动、植物，也不会对正常微生物群落和环境造成污染。噬菌体具有宿主依赖性，随宿主的清除而消亡，不会残留在动物体内。

研发能够高效裂解地中海弧菌的噬菌体对养殖业的健康、持续发展具有重要的现实意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可高效、快速地裂解地中海弧菌的噬菌体及其应用。该噬菌体特异性感染、裂解地中海弧菌。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种以地中海弧菌117-T6株为靶标分离获得的特异侵染地中海弧菌的裂解性噬菌体，依据噬菌体命名原则命名vB_VmeM-Yong(即Virus of bacteria，Vibrio mediterranei，Myoviridae的缩写)，分类上属于肌尾科Myoviridae。vB_VmeM-Yong于2019年1月22日保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17098，保藏机构地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

该噬菌体的生物学特征如下：噬菌体vB_VmeM-Yong具有呈现二十面体近似球形的头部，直径109nm(±9nm)，具有可收缩的尾部，长度320nm(±50nm)；噬菌体vB_VmeM-Yong在地中海弧菌的菌平板上可以形成透明的噬菌斑；噬菌体vB_VmeM-Yong可裂解地中海弧菌，使菌液澄清化；噬菌体vB_VmeM-Yong的宿主范围具有种特异性；vB_VmeM-Yong潜伏期约为40min，裂解期为40min-150min。

上述噬菌体vB_VmeM-Yong的分离纯化方法，具体包括如下步骤：

(1)地中海弧菌117-T6的活化、培养