[发明专利]一种大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法

权利要求书

1.一种大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、ASP干粉溶解；

将ASP干粉与弱酸性盐缓冲液按照固液比为1:40-60混合，搅拌溶解，得到溶解液，所述弱酸性盐为磷酸盐；

S2、溶解液脱盐；

将溶解液的蛋白质脱盐至溶解液电导率1mS/cm，调整溶解液的pH值至6-7，过滤后得到纯化上样液；

S3、蛋白质层析纯化；

将上样液使用阴离子填料捕获，并用pH值为6-7的弱酸性盐缓冲液和盐梯度为100mmol/L-400mmol/L的NaCl洗脱，分别得到BBI蛋白组分溶液和KTI蛋白组分溶液，所述阴离子填料为琼脂糖凝胶型阴离子型填料，所述弱酸性盐为磷酸盐；

S4、浓缩；

分别对BBI蛋白组分溶液和KTI蛋白组分溶液进行超滤脱盐与浓缩，得到蛋白浓度50mg/ml的BBI蛋白浓缩液和KTI蛋白浓缩液；

S5、蛋白混合；

分别在BBI蛋白浓缩液和KTI蛋白浓缩液中加入蛋白总量10％的弱酸性盐，并根据混合比例取用BBI蛋白浓缩液和KTI蛋白浓缩液进行混合，使用微米滤器过滤得到半成品制剂，所述弱酸性盐为磷酸盐；

S6、干燥；

对半成品制剂进行低温喷雾干燥，控制进风温度为90-140℃，得到大豆胰蛋白酶抑制剂提取物。

2.如权利要求1所述的大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，在所述S1之后，还包括：

高速离心或过滤溶解液中的不溶物。

3.如权利要求1所述的大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，所述溶解液的电导率为4-10mS/cm，pH为4.5-6.5。

4.如权利要求1所述的大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，所述将溶解液的蛋白质脱盐具体包括：

采用超滤膜进行纯水置换，使溶解液的蛋白质脱盐，并去除溶解液中的小分子物质。

5.如权利要求4所述的大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，所述超滤膜为中空纤维膜或卷式膜，膜材质为聚丙烯或聚醚砜，超滤膜的截留分子量为3kDa-10kDa。

6.如权利要求5所述的大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，所述超滤膜为聚醚砜卷式膜，膜截留分子量为3kDa。

7.如权利要求1所述的大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，所述阴离子填料为DEAE Sepharose FF填料或高分子基质DEAE填料，蛋白载量30-60mg/ml，操作线流速60-120cm/h。

8.如权利要求1所述的大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，所述S4中，BBI蛋白浓缩液通过超滤膜进行30kDa和3kDa两步超滤；KTI蛋白浓缩液通过10kDa一步超滤浓缩与脱盐置换；

所述超滤膜为中空纤维膜管或平板膜包。

9.如权利要求1-8任一项所述的大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，其特征在于，所述S5中，BBI蛋白浓缩液和KTI蛋白浓缩液按照蛋白总量为2:1的混合比例进行混合；

所述微米滤器为0.22微米滤器。