[发明专利]一种大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法

说明书

本发明提供了一种大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，包括以下步骤：S1、ASP干粉溶解；S2、溶解液脱盐；S3、蛋白质层析纯化；S4、浓缩；分别对BBI蛋白组分溶液和KTI蛋白组分溶液进行超滤脱盐与浓缩，得到蛋白浓度50mg/ml的BBI蛋白浓缩液和KTI蛋白浓缩液；S5、蛋白混合；分别在BBI蛋白浓缩液和KTI蛋白浓缩液中加入蛋白总量10％的弱酸性盐，进行混合，使用微米滤器过滤得到半成品制剂；S6、干燥；对半成品制剂进行低温喷雾干燥，控制进风温度为90‑140℃，得到大豆胰蛋白酶抑制剂提取物。本大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，能够对从豆清水中提取出大豆胰蛋白酶抑制剂提取物进行纯化，去除杂质，提高大豆胰蛋白酶抑制剂的纯度，达到药用辅料要求。

技术领域

本发明涉及大豆胰蛋白酶抑制剂技术领域，尤其涉及一种大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法。

背景技术

大豆乳清废水(下称豆清水)是低温脱脂豆粕碱溶酸沉法生产大豆分离蛋白得到的副产物，生产1t大豆分离蛋白需要排放30-35t豆清水。豆清水中含有大量可回收利用的物质，如大豆乳清蛋白、大豆低聚糖和大豆异黄酮等，还有尚未完全沉淀的大豆球蛋白，少量脂肪以及磷脂、植酸等物质。

大豆乳清蛋白(Soybean Whey Protein，SWP)是大豆中的酸溶性蛋白，占大豆蛋白总含量的10％左右，大豆乳清中含有13种蛋白质，包括两种胰蛋白酶抑制剂、β-淀粉酶、脂肪氧化酶和凝集素等。大豆胰蛋白酶抑制剂(Soy Bean Trypsin Inhibitors，SBTI)是大豆中主要的抗营养因子，目前已分离得到的有Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(Kuni TztrypsinInhibitor，KTI)和Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂(Bowman-Birktrypsin Inhibitor，BBI)，其中KTI为单头抑制剂，可抑制胰蛋白酶的活性，BBI为双头抑制剂，可同时抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，从而降低大豆蛋白的营养价值与食用安全性。对食品工业来说，需要除去或失活SBTI来提高大豆制品的营养价值。随着研究的不断深入，发现胰蛋白酶抑制剂具有抗癌、抗炎、降低胆固醇等作用，对糖尿病的调节也有一定的效果，在医药领域具有潜在的应用价值和市场前景。

通过将豆清水通过预处理、浓缩、盐析、盐析沉淀分离、分散和干燥后，可以从豆清水中提取出大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物(ASP)，但是ASP中除了SBTI粗蛋白之外，还含有少量大豆低聚糖、色素等杂质，影响大豆胰蛋白酶抑制剂的纯度。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题是提供一种大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，能够对从豆清水中提取出大豆胰蛋白酶抑制剂提取物进行纯化，去除杂质，提高大豆胰蛋白酶抑制剂的纯度。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物的纯化方法，包括以下步骤：

S1、ASP干粉溶解；

将ASP干粉与弱酸性盐缓冲液按照固液比为1:40-60混合，搅拌溶解，得到溶解液；

S2、溶解液脱盐；

将溶解液的蛋白质脱盐至溶解液电导率1mS/cm，调整溶解液的pH值至6-7，过滤后得到纯化上样液；

S3、蛋白质层析纯化；

将上样液使用阴离子填料捕获，并用pH值为6-7的弱酸性盐缓冲液和盐梯度为100mmol/L-400mmol/L的NaCl洗脱，分别得到BBI蛋白组分溶液和KTI蛋白组分溶液；

S4、浓缩；

分别对BBI蛋白组分溶液和KTI蛋白组分溶液进行超滤脱盐与浓缩，得到蛋白浓度50mg/ml的BBI蛋白浓缩液和KTI蛋白浓缩液；

S5、蛋白混合；