[发明专利]一种鸡性连锁矮小基因的检测方法

权利要求书

1.用于检测鸡性连锁矮小基因的KASP引物，由引物1、引物2和引物3组成；

所述引物1为自5’端到3’端依次为特异性荧光序列A和SEQ ID No.1的第22-42位核苷酸所示的单链DNA；

所述引物2为自5’端到3’端依次为特异性荧光序列B和SEQ ID No.2的第22-46位核苷酸所示的单链DNA；

所述引物3为核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的单链DNA。

2.根据权利要求1所述的KASP引物，其特征在于：所述特异荧光序列A和所述特异荧光序列B，其一为荧光序列FAM，另一为荧光序列HEX。

3.根据权利要求2所述的KASP引物，其特征在于：所述荧光序列FAM的核苷酸序列为SEQID No.1的第1-21位；所述荧光序列HEX的核苷酸序列为SEQ ID No.2的第1-21位。

4.根据权利要求3所述的KASP引物，其特征在于：所述引物1为核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示的单链DNA；所述引物2为核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的单链DNA。

5.用于检测鸡性连锁矮小基因的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1-4中任一所述的KASP引物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有荧光探针A、荧光探针B、淬灭探针A和淬灭探针B；

所述荧光探针A为与所述特异荧光序列A一致的序列，5’末端连接荧光报告基团A；所述淬灭探针A为所述特异荧光序列A的反向互补序列，3’末端连接荧光淬灭基团；

所述荧光探针B为与所述特异荧光序列B一致的序列，5’末端连接荧光报告基团B；所述淬灭探针B为所述特异荧光序列B的反向互补序列，3’末端连接荧光淬灭基团。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述荧光报告基团A和所述荧光报告基团B，其一为FAM，另一为HEX；所述荧光淬灭基团为BHQ。

8.一种检测或辅助检测鸡的性连锁矮小基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所述待测鸡的基因组DNA为模板，采用权利要求5-7中任一所述试剂盒中的所述KASP引物进行PCR扩增，将所得扩增产物进行荧光信号扫描，然后按照如下确定所述待测鸡的性连锁矮小基因的基因型：

若所述PCR产物仅显示SEQ ID No.1所示的单链DNA分子5'端连接的特异荧光序列对应的荧光报告基团的颜色，则所述待测鸡为性连锁矮小基因纯合子，记为oo基因型；

若所述PCR产物仅显示SEQ ID No.2所示的单链DNA分子5'端连接的特异荧光序列对应的荧光报告基团的颜色，则所述待测鸡为非性连锁矮小基因纯合子，记为OO基因型；

若所述PCR产物显示SEQ ID No.1所示的单链DNA分子5'端连接的特异荧光序列对应的荧光报告基团的颜色和SEQ ID No.2所示的单链DNA分子5'端连接的特异荧光序列对应的荧光报告基团的颜色，则所述待测鸡为性连锁矮小基因杂合子，记为Oo基因型。

9.一种培育具有目标性状的矮小鸡的方法，包括如下步骤：采用不具所述目标性状、通过权利要求8所述的方法检测得到的性连锁矮小基因为oo基因型的矮小鸡作为供体亲本，采用具有所述目标性状的鸡作为轮回亲本，进行回交，并将回交后代进行自交，从自交后代中获得具有所述目标性状、通过权利要求8所述的方法检测得到的性连锁矮小基因为oo基因型的矮小鸡。

10.如下任一应用：

(A1)权利要求1-4中任一所述的KASP引物或权利要求5-7中任一所述的试剂盒在检测或辅助检测鸡的性连锁矮小基因的基因型中的应用；

(A2)权利要求1-4中任一所述的KASP引物或权利要求5-7中任一所述的试剂盒或权利要求8或9所述的方法在鸡的遗传育种中的应用；

(A3)权利要求1-4中任一所述的KASP引物或权利要求5-7中任一所述的试剂盒或权利要求8或9所述的方法在鸡的矮小型配套系的选育中的应用；

(A4)权利要求1-4中任一所述的KASP引物或权利要求5-7中任一所述的试剂盒或权利要求8所述的方法在培育具有目标性状的矮小鸡中的应用。