[发明专利]一种鸡性连锁矮小基因的检测方法

说明书

本发明公开了一种鸡性连锁矮小基因的检测方法。本发明提供了用于检测鸡性连锁矮小基因的KASP引物，由引物1、引物2和引物3组成；所述引物1为自5’端到3’端依次为特异性荧光序列A和SEQ ID No.1的第22‑42位的单链DNA；所述引物2为自5’端到3’端依次为特异性荧光序列B和SEQ ID No.2的第22‑46位的单链DNA；所述引物3为SEQ ID No.3所示的单链DNA。本发明KASP引物能对鸡的性连锁矮小基因进行准确基因型鉴定，可以大大节约时间和人工成本，提高分子标记辅助选择的育种效率，对于通过在地方鸡种中引入性连锁矮小基因，进行矮小型配套系的选育和开发具有重要的生产和研究意义。

技术领域

本发明涉及动物遗传育种分子标记辅助选择技术领域，特别涉及一种鸡性连锁矮小基因的检测方法。

背景技术

鸡性连锁矮小基因(dw基因)是已知的8种矮小基因中被认为是唯一对鸡本身的健康无害，对人类有利的隐性、伴性突变基因，引起广泛关注并应用于实际生产之中。dw基因能够抑制鸡生长发育，成年母鸡体重减轻30％，成年公鸡体重减轻40％，胫骨缩短1/3左右。由于矮小鸡具有基础代谢率低、耗料少、饲养密度大、适应性和抗应激强等优势，通过在地方鸡种中引入矮小基因，进行矮小型配套系的选育和开发具有重要的生产和研究意义。

但矮小型纯合子、矮小型杂合子与正常型个体在幼龄时无法通过体型、外貌进行区分，需至8周龄左右时通过体重、胫长等指标加以区分矮小型纯合子鸡(Z^dwZ^dw)与正常型鸡(Z^DwZ^Dw和Z^DwZ^dw)。此外，对于正常型杂合子鸡(Z^DwZ^dw)与正常型纯合子鸡(Z^DwZ^Dw)在成年鸡中也不能通过体尺外貌加以准确区分。

鸡GHR基因定位在Z染色体短臂上，共编码608个氨基酸(包括16个氨基酸的信号肽)，其中外显子1长度不一，调控转录的起始；翻译起始位点位于外显子2上，该外显子编码前体蛋白的信号肽；cGHR基因缺少外显子3(和人的GHR基因比较)；外显子4～7编码GHR蛋白的细胞外结构域；外显子8编码蛋白的跨膜结构域；外显子9～10编码细胞内结构域。缺失突变是目前导致矮小鸡的主要原因之一，Agarwal(1994)发现正常鸡中的一个6.0kb的条带在矮小鸡中被一个4.3kb的条带取代。并认为这1.7kb的缺失是导致矮小鸡的原因，这一缺失出现在外显子10区和3’UTR区。国内李宁等(1997)对GRH基因进行了克隆，对其5’端部分序列进行了分析，并对矮小鸡GHR基因位点进行了多态性分析，发现在其3’端的一段6.0kb的区域中，矮小鸡仅为4.1kb。

目前通过分子生物学方法进行的检测主要是在生长素受体(GHR)基因缺失片段两端设计特异性引物进行扩增，但由于该基因缺失片段较长，使得模板DNA对引物形成竞争，导致杂合子中只能检测到缺失后的片段而检测不到完整的片段，从而难以准确鉴定杂合子公鸡与正常公鸡。

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡性连锁矮小基因的检测方法。

第一方面，本发明要求保护一种用于检测鸡性连锁矮小基因的KASP引物。

本发明所要求保护的用于检测鸡性连锁矮小基因的KASP引物，由引物1、引物2和引物3组成；

所述引物1为自5’端到3’端依次为特异性荧光序列A和SEQ ID No.1的第22-42位核苷酸所示的单链DNA；

所述引物2为自5’端到3’端依次为特异性荧光序列B和SEQ ID No.2的第22-46位核苷酸所示的单链DNA；

所述引物3为核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的单链DNA。

进一步地，所述特异荧光序列A和所述特异荧光序列B，其一可为荧光序列FAM，另一可为荧光序列HEX。