[发明专利]一种定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、R2和R3，其中：

试剂R1为包含链霉亲和素磁颗粒的悬浮液；

试剂R2为包含化学发光标记物标记的地高辛单克隆抗体的溶液；

试剂R3为包含偶联标记物标记的地高辛衍生物的溶液。

2.根据权利要求1所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.01％～1％。

3.根据权利要求2所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中链霉亲和素磁颗粒的粒径是0.05～3μm。

4.根据权利要求1所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中地高辛单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:1～1:20。

5.根据权利要求4所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中化学发光标记物标记的地高辛单克隆抗体的浓度为≥10ng/mL。

6.根据权利要求4所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。

7.根据权利要求1所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，试剂R3中地高辛衍生物与偶联标记物的摩尔比为1:1～1:20。

8.根据权利要求7所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，试剂R3中偶联标记物标记的地高辛衍生物的浓度为

≥5ng/mL。

9.根据权利要求7所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，试剂R3中所述地高辛衍生物为地高辛-BSA或地高辛-OVA，所述偶联标记物为生物素。

10.根据权利要求1-9任一项所述的定量检测地高辛的化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1、试剂R1的制备：

将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试剂；其中，所述的链霉亲和素磁颗粒溶液的浓度为50～100mg/ml；链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液的体积比优选为(0.5～1)：(5～10)；所述的缓冲液为50mM MES、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300，pH6.5或100mMPBS、0.1％吐温-20、0.1％Proclin300，pH7.2；所述的固相试剂的浓度优选为0.01％～1％；

步骤S2、试剂R2的制备：

将地高辛单克隆抗体放入离心管中离心，然后加入磷酸缓冲液，混匀后加入化学发光标记物溶液离心，将离心管密封后放入避光暗盒中，混匀，加入封闭液，混匀，将封闭好的抗体经过纯化、收集，然后放入缓冲液中稀释，保存；其中，所述的地高辛单克隆抗体与化学发光标记物摩尔比为1:1～1:20；所述的化学发光标记物溶液的浓度为2～2.5mg/mL；所述的封闭液为赖氨酸，质量分数为20～25％；所述的缓冲液为50mM MES、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300，pH6.5或100mM PBS、0.1％吐温-20、0.1％

Proclin300，pH6.0；

步骤S3、试剂R3的制备：

将地高辛衍生物放入离心管中离心，然后加入TRIS缓冲液，混匀后加入偶联标记物溶液离心，混匀后加入封闭液，混匀，将封闭好的抗体经过纯化、收集，然后放入缓冲液中稀释，保存；所述的地高辛衍生物与偶联标记物的摩尔比为1:1～1:20；所述的偶联标记物溶液的浓度优选为2-3mg/mL；所述的封闭液优选为赖氨酸，质量分数为20～25％；所述的缓冲液为50mM MES、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300，pH6.5或100mM PBS、0.1％吐温-20、0.1％Proclin300，pH6.0。