[发明专利]一种间充干细胞的制备方法

说明书

本发明公开了一种间充干细胞的制备方法，具体制作方法包括以下，S1,首先对提取的生物组织进行充分的清洗，以备用；S2,将生物组织送入离心旋转机中进行高速旋转分离，并加入生物酶进行溶解；S3，对细胞进行诱导分化；S4,采用基因克隆方法进行复制干细胞；S5,制作培养基，将分化后的干细胞进行培养，并冷藏保存。本发明通过采用诱导分化技术及克隆技术基础上，进行制作间充干细胞，获得的干细胞具有高纯度、高活率、无污染，并且整体原材料较为广泛，且整体制作方法较为效率，并且可以通过制作的培养基进行长期保存，值得推广。

技术领域

本发明涉及间充干细胞技术领域，尤其是一种间充干细胞的制备方法。

背景技术

间充质干细胞最早在骨髓中发现，随后还发现存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。目前,我们能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带血中分离和制备间充质干细胞，用得最多的是骨髓来源的间充质干细胞。但骨髓来源的间充质干细胞存在以下问题：随着年龄的老化，干细胞数目显著降低、增殖分化能力大幅度衰退；制备过程不容易质控；移植给异体可能引起免疫反应；取材时对患者有损伤，患者有骨髓疾病时不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。这都限制了骨髓间充质干细胞临床应用，使得寻找骨髓以外其他可替代的间充质干细胞来源成为一个重要的问题。

2006年，我国在胎盘和脐带组织中分离出间充质干细胞，这种组织来源的间充质干细胞不仅保持了间充质干细胞的生物学特性，而且还具备如下优点：①胎盘和脐带中的干/祖细胞更原始，有更强的增殖分化能力。②免疫细胞较为幼稚，功能活性低，不会触发免疫反应及引起移植物抗宿主病。③干细胞易于分离，纯度高，无肿瘤细胞污染。④扩增时培养体系能统一，便于质控。⑤可制成种子细胞冷冻，多次使用，冷冻后细胞损失小。⑥潜伏性病毒和病原微生物的感染及传播几率比较低。⑦采集时对产妇及新生儿无任何危害及损伤。⑧采集方便，易于保存和运输，伦理学争议少。这种胎盘和脐带来源的间充质干细胞有可能成为骨髓间充质干细胞的理想替代物，并具有更大的应用潜能。鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、能支持造血和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离培养操作简便等特点，正日益受到人们的关注。随着间充质干细胞及其相关技术的日益成熟，临床研究已经在许多国家开展。作为种子细胞,临床上主要用于治疗机体无法自然修复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病；作为免疫调节细胞，治疗免疫排斥和自身免疫性疾病。

然而自体间充质干细胞的应用过程中逐渐暴露了不便之处：例如扩增能力个体差异很大；潜在的肿瘤细胞污染风险；培养需要一定的时间，不能及时适应病情的需要等。这些制约了自体间充质干细胞的使用。间充质干细胞给未来的再生医学带来了新希望,对间充质干细胞更深入的研究和临床应用必将在不远的将来造福人类。其中，胎盘和脐带来源的间充质干细胞具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、无道德伦理问题的限制、易于工业化制备等特征，有可能成为最具临床应用前景的多能干细胞，针对以上，在此我们提出一种间充干细胞的制备方法。

发明内容

本发明针对现有的间充干细胞制作方面等技术上的不足，提供了一种间充干细胞的制备方法。

本发明为解决上述现象，采用以下改性的技术方案，一种间充干细胞的制备方法，具体制作方法包括以下，

S1,首先对提取的生物组织进行充分的清洗，以备用；

S2,将生物组织送入离心旋转机中进行高速旋转分离，并加入生物酶进行溶解；

S3，对细胞进行诱导分化；

S4,采用基因克隆方法进行复制干细胞；

S5,制作培养基，将分化后的干细胞进行培养，并冷藏保存。

所述生物组织包括骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织及牙髓。