[发明专利]人成纤维细胞无血清培养基和制备方法及人成纤维细胞无血清调节培养液的获取方法

说明书

一种人成纤维细胞无血清培养基，包括基础培养基和无血清培养上清浓缩液，还包括如下组分及其浓度：维生素组合物为5‑100ng/mL，葡多酚为50‑200μg/mL，重组人表皮细胞生长因子为1～50ng/mL，重组人碱性成纤维细胞生长因子为50～200ng/mL，重组人转化生长因子β1为1～50ng/mL，重组血小板衍生生长因子‑C为1～10ng/mL，重组人胰岛素样生长因子‑1浓度为1～10ng/mL，β‑巯基乙醇为50～200μM，人血白蛋白浓度为1～100μg/mL，谷胱甘肽浓度为1‑100μg/mL，黄芪多糖为1‑50μg/mL，透明质酸0.1‑5μg/mL，碳酸氢钠为1.0‑3.7g/L。利用无血清培养基替代传统含动物血清的培养基来培养人成纤维细胞，避免了动物源性成分污染以及异种蛋白引起人体免疫反应等不安全因素。

技术领域

本发明属于皮肤修复技术领域，涉及一种人成纤维细胞无血清培养基，一种人成纤维细胞无血清培养基的制备方法，以及一种人成纤维细胞无血清培养液的获取方法。

背景技术

人成纤维细胞是构成皮肤真皮层的主要细胞，其正常的增殖、分化维系着皮肤正常的结构和生理功能。可通过自分泌或旁分泌的方式分泌细胞生长因子、胶原蛋白、应激蛋白及其他胞外蛋白，这些细胞分泌的营养物质可协同作用于皮肤，刺激皮肤组织中透明质酸、胶原蛋白、弹性蛋白的再生，修复受损细胞，促进创面愈合。

近年来，人成纤维细胞的体外扩增是在补充有胎牛血清或补充有人的自体血清或基本等同相似的血清的培养基中进行。然而，牛血清、人血清或其它动物血清可能含有血液传播的病原体，牛血清还会激发抗异性生物质蛋白抗体的产生，异型生物质蛋白可激发受体患者的免疫应答；另外，牛血清会显示出批次间差异，导致性能不一致。

目前虽然市场上存在一些可购买的人成纤维细胞培养的血清替代物，但是效果仍不甚理想，容易受到某些机械因素和化学因素的影响，致使影响人成纤维细胞的贴壁、增殖以及稳定性的维持。

人成纤维细胞不仅可以应用到临床治疗中，而且其细胞培养过程中产生的培养上清液也具有非常好的美容护肤作用。

人成纤维细胞调节培养液(即人成纤维细胞培养上清液)来源于人成纤维细胞体外培养过程中的培养上清，富含多种细胞生长因子，胶原蛋白等生物活性成分，近年来在生物技术领域迅速发展。

发明内容

本发明的目的是提供一种人成纤维细胞无血清培养基，解决了现有技术中含血清培养人成纤维细胞不安全因素。

本发明的第二个目的在于提供一种人成纤维细胞无血清培养基的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供一种人成纤维细胞无血清培养液的培养方法，其制得的培养液具有抗衰功效。

本发明所采用的第一个技术方案是：

一种人成纤维细胞无血清培养基，包括基础培养基和无血清培养上清浓缩液，还包括如下组分及其浓度：维生素组合物为5-100ng/mL，葡多酚为50-200μg/mL，重组人表皮细胞生长因子为1～50ng/mL，重组人碱性成纤维细胞生长因子为50～200ng/mL，重组人转化生长因子β1为1～50ng/mL，重组血小板衍生生长因子-C为1～10ng/mL，重组人胰岛素样生长因子-1浓度为1～10ng/mL，β-巯基乙醇为50～200μM，人血白蛋白浓度为1～100μg/mL，谷胱甘肽浓度为1-100μg/mL，黄芪多糖浓度为1-50μg/mL，透明质酸浓度为0.1-5μg/mL，碳酸氢钠为1.0-3.7g/L。

本发明的第一个特点还在于，

基础培养基的体积百分比为90～98％，无血清培养上清浓缩液的体积百分比为2～10％。

基础培养基采用DMEM培养基，或采用DMEM培养基与F12培养基的混合培养基。

本发明所采用的第二个技术方案是：