[发明专利]基于普通PCR技术的木毒蛾快速鉴定引物及其应用、鉴定方法在审
| 申请号： | 201910796870.7 | 申请日： | 2019-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN110484634A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 吴志毅;程帆;陈鹏程;李凯兵;任琰;张文俊 | 申请（专利权）人： | 浙江省检验检疫科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 33213 杭州浙科专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 吴秉中<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 311215 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核苷酸序列 快速鉴定 上游引物 下游引物 幼虫 引物 线粒体COI基因 特异性引物 形态鉴定 植物检疫 毒蛾属 虫体 卵块 昆虫 混淆 林业 应用 | ||
【权利要求书】：
1.基于普通PCR技术的木毒蛾快速鉴定引物，其特征在于包括上游引物LX-F和下游引物LX-R，所述上游引物LX-F核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物LX-R核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.如权利要求1所述的引物在快速鉴定木毒蛾与其近缘种中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述木毒蛾近缘种包括舞毒蛾、栎毒蛾、枫毒蛾和雪松毒蛾。
4.基于普通PCR技术的木毒蛾快速鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取上游引物LX-F和下游引物LX-R，分别对木毒蛾与其近缘种进行特异性PCR扩增；
2）取扩增产物进行电泳，染色，成像分析，若扩增得到424bp条带，则鉴定为木毒蛾。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述步骤1）中PCR反应体系为20μL，包括1 μL模板DNA，10 μM上下游引物各0.4μL，2.5mM dNTPs1.6μL，2 μL 10 × PCR buffer，5 U/μLTaqDNA polymerase0.1 μL，13.5 μL ddH2O，PCR buffer含有Mg2 +；PCR反应条件为：94ºC预变性3 min；然后进入循环，94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环；最后72℃延伸10 min。
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