[发明专利]一种回输临床治疗用自体脂肪干细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明实施例公开了一种回输临床再生医学，自体脂肪干细胞及其制备方法和应用，所述制备方法包括如下步骤：(a)采集自体脂肪体液样本；(b)将自体脂肪体液样本添加到含有抗生素、胶原酶的磷酸盐缓冲液中进行沉降并收集沉降物；(c)在沉降物中添加含有胶原酶的磷酸盐缓冲液中进行恒温培养、离心，即得所述自体脂肪干细胞；本发明制备方法通过抗生素和胶原酶的添加能够充分分解蛋白并抑制蛋白的合成，进而提高脂肪干细胞的产率和纯度，并通过选用自体脂肪干细胞，在回输时避免排斥反应，更好地提高再生医学修复效果。

技术领域

本发明实施例涉及组织工程技术领域，具体涉及一种回输临床治疗用自体脂肪干细胞及其制备方法和应用。

背景技术

干细胞是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是机体的起源细胞，是形成人体各种组织器官的原始细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，医学界称其为“万用细胞”。

干细胞治疗是把健康的干细胞移植到病人或自己体内，以达到修复病变细胞或重建功能正常的细胞和组织的目的。干细胞再生修复疗法就像给机体注入新的活力，是从根本上修复许多疾病的有效方法。

目前，干细胞治疗主要是采用异体干细胞，如新生儿脐带、骨髓等，这些异体干细胞目前社会免费招募亚建康者自愿申请临床实验应用阶段。在临床应用显示修复效果还需较长的时间去验证。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种回输临床治疗用自体脂肪干细胞的制备方法，以解决现有技术中采用异体体干细胞存在的远期难已估计的不良效果及较差的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面一种回输临床治疗用自体脂肪干细胞的制备方法，所述孩子被方法包括如下步骤：

(a)采集自体脂肪体液样本；

(b)将自体脂肪体液样本添加到含有抗生素、胶原酶的磷酸盐缓冲液中进行沉降并收集沉降物；

(c)在沉降物中添加含有胶原酶的磷酸盐缓冲液中进行恒温培养、离心，即得所述自体脂肪干细胞。

本发明通过上述特定的制备方法，通过抗生素和胶原酶的添加能够充分分解蛋白并抑制蛋白的合成，进而提高脂肪干细胞的产率和纯度，并通过选用自体脂肪干细胞，在回输时避免排斥反应，更好地提高再生医学修复效果。

进一步地，所述自体脂肪体液样本的采集具体包括：

在患者臀部或大腿内侧设计采集部位，并采用微针在采集部位周围注射肿胀液，待麻醉后，在麻醉部位吸取自体脂肪体液样本。

进一步地，所述肿胀液由45％生理盐水12-18ml、肾上腺素0.3-0.7g和盐酸利多卡因8-12ml组成。

进一步地，所述步骤(b)中，自体脂肪体液样本的添加量与含有抗生素、胶原酶的磷酸盐缓冲液的体积比为1∶(0.8-1.2)，所述含有抗生素、胶原酶的磷酸盐缓冲液中抗生素含量为0.8-1.2％；胶原酶含量为0.08-0.12％；磷酸盐缓冲液为pH6.5-7.0、0.08-0.12M的磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述步骤(b)中，沉降时间为25-35min。

进一步地，所述步骤(c)中，含有胶原酶的磷酸盐缓冲液的添加量与自体脂肪体液样本的体积比为1∶(0.8-1.2)；含有胶原酶的磷酸盐缓冲液中胶原酶的含量为0.08-0.12％；磷酸盐缓冲液为pH6.0-7.0、0.08-0.12M的磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述步骤(c)中，恒温培养温度为35-38℃，时间为50-70min。

进一步地，所述步骤(c)中，离心转速为1200-1800rpm，离心时间为8-12min。