[发明专利]一种同时检测多种金黄色葡萄球菌肠毒素的荧光编码微球试纸条的制备方法

权利要求书

1.一种同时检测多种金黄色葡萄球菌肠毒素的荧光编码微球试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、制备碳量子点荧光编码微球；

首先将1 g蔗糖和10 mL磷酸混合搅拌后置于功率条件为750 W的微波炉中分别加热1min和30 s，获得2种荧光碳量子，记为CQD1和CQD2；然后将CQD1和CQD2以m种不同配比混合，得到m种碳量子点混合物，分别分散于氯仿中，分别再加入聚(马来酸酐-alt-1-十八碳烯)、聚甲基丙烯酸甲酯、十二烷基磺酸钠进行第一次超声分散，最后再加入氢氧化钠进行第二次超声分散，经离心、洗涤后得到m种碳量子点荧光编码微球，记为QB₁、QB₂、QB₃、……、QB_m；

步骤2、取m种金黄色葡萄球菌肠毒素，分别记为SE1、SE2、SE3、……、和SEm；m种金黄色葡萄球菌肠毒素对应的抗体分别记为Ab₁、Ab₂、Ab₃、……、Ab_m；

先取步骤1制备的荧光编码微球QB₁、牛血清蛋白和1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）碳二亚胺加入磷酸缓冲液中，进行第一次搅拌反应，随后加入SE1的抗体Ab₁和N-羟基硫代琥珀酰亚胺，进行第二次搅拌反应，反应结束后离心，获得荧光编码微球标记抗体探针QB₁@Ab₁；

同理，按照上述步骤，将QB₂与SE2的抗体Ab₂结合，将QB₃与SE3的抗体Ab₃结合，……，将QB_m与SEm的抗体Ab_m结合，最后获得QB₂@Ab₂、QB₃@Ab₃、……、QB_m@Ab_m荧光抗体探针；即用步骤1中得到的m种碳量子点荧光编码微球，一一对应标记肠毒素的抗体，得到m种荧光抗体探针；最后将m种荧光抗体探针等质量溶解在含有蔗糖和吐温20的磷酸缓冲液中，得到含有m种荧光抗体探针的混合液；

步骤3、荧光编码微球试纸条的制备；

S1、将步骤2中制备的荧光抗体探针混合液均匀喷涂到玻璃纤维膜上，作为结合垫, 烘干备用；然后在硝酸纤维素膜上标记出m条测试线T和1条质控线，测试线分别记为T1、T2、T3、……、和Tm，质控线记为C1，所述测试线和质控线的线条保持一定的宽度，线条之间保持一定的间距；

取m种金黄色葡萄球菌肠毒素抗原，分别记为SE1-BSA、SE2-BSA、SE3-BSA、……、SEm-BSA；然后用喷膜机将SE1-BSA喷至测试线T1处，SE2-BSA喷至测试线T2处，……、SEm-BSA喷至测试线Tm处，完成测试线的制备；再将羊抗鼠IgG免疫球蛋白喷至质控线C1处，完成质控线的制备；将得到硝酸纤维素膜烘干备用；

S2、取PVC衬板作为试纸条的基底，在PVC衬板基底上由左至右分别粘贴样品垫、结合垫、具有m条测试线T和1条质控线C1的硝酸纤维素膜和吸收垫；两个相邻粘贴物之间互相重叠，样品垫右端和结合垫左端重叠，结合垫右端和硝酸纤维素膜左端重叠，硝酸纤维素膜右端和吸收垫左端重叠；粘结完成后，适当裁剪，得到荧光编码微球试纸条。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测多种金黄色葡萄球菌肠毒素的荧光编码微球试纸条的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述CQD1和CQD2混合时的质量比为0~3：0~2.5，且CQD1和CQD2不同时为0。

3. 根据权利要求1所述的一种同时检测多种金黄色葡萄球菌肠毒素的荧光编码微球试纸条的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述碳量子点混合物、氯仿、聚(马来酸酐-alt-1-十八碳烯)、聚甲基丙烯酸甲酯、十二烷基磺酸钠和氢氧化钠的用量比为 0.2~0.8 g：5~10 L：1~2 g：1~2 g：0.1~ 0.5 g：0.1~1 g；所述第一次超声分散的时间为5~20 min，第二次超声分散的时间为15 ~30 min。