[发明专利]沉默小菜蛾整合素β1亚基基因Pxβ的RNAi载体及其应用

权利要求书

1.一种沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体，其特征在于：选用小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的497 bp序列作为靶标序列，构建表达靶标基因序列dsRNA的植物表达RNAi载体，所述的靶标序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体，其特征在于：通过Gateway同源重组技术将靶标序列插入植物表达载体pHellsgate-4中，构建表达靶标基因序列dsRNA的植物表达RNAi重组载体pHells-dsβ，在该载体中小菜蛾基因Pxβ靶标序列片段以正反两个方向相向排列，中间包含一个PDK内含子序列，以CaMV 35S启动子启动表达，OCS terminator为终止子，具有真核卡那霉素抗性和原核壮观霉素抗性。

3.如权利要求1所述沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取小菜蛾RNA，反转录为cDNA，以该cDNA为模板，扩增获得整合素β₁亚基基因Pxβ全长，并将其插入克隆载体pEASY-Blunt中获得重组克隆载体pEASY-Pxβ；

（2）在小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ内选择了一个长为497 bp的保守区域，PCR克隆该序列，且在克隆序列的两端分别添加用于Gateway同源重组的同源臂序列attB₁和attB₂；

（3）利用Gateway同源重组技术将克隆的靶标序列片段与植物表达载体pHellsgate-4连接，使靶标序列片段以正反两个方向分别插入载体中，其中两个序列片段之间包含一个PDK内含子序列，以CaMV 35S启动子启动表达，OCS terminator为终止子，具有真核卡那霉素抗性和原核壮观霉素抗性，从而获得表达Pxβ靶标序列dsRNA的植物表达RNAi载体，命名为pHells-dsβ载体。

4.一种含有沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体的微生物转化体。

5.根据权利要求4所述的一种含有沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体的微生物转化体，其特征在于：所述微生物转化体为包含沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体的大肠杆菌和农杆菌。

6.一种含有沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体应用于抗小菜蛾转基因植物制备中。

7.根据权利要求6所述的一种含有沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体应用于抗小菜蛾转基因植物的制备中，其特征在于：所得转基因植物成功表达了小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ靶标区段序列的dsRNA。

8.根据权利要求6所述的一种含有沉默小菜蛾整合素β₁亚基基因Pxβ的RNAi载体应用于抗小菜蛾转基因植物的制备中，其特征在于：小菜蛾取食所得转基因植物后靶标基因整合素β₁亚基Pxβ的转录表达水平显著降低，且蛹重减轻、化蛹率下降，从而导致死亡率显著升高。