[发明专利]用于肺癌检测的DNA甲基化qPCR试剂盒及使用方法在审

申请号：	201910803904.0	申请日：	2019-08-28
公开（公告）号：	CN110387421A	公开（公告）日：	2019-10-29
发明（设计）人：	王志强;万季;潘晓新;夏迪;余涛;金泰庆;罗海燕;蔡雪儿;宋麒	申请（专利权）人：	深圳市新合生物医疗科技有限公司
主分类号：	C12Q1/6886	分类号：	C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
代理公司：	北京冠和权律师事务所 11399	代理人：	张楠楠
地址：	518055 广东省深圳市南山***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	肺癌检测试剂盒血浆游离DNA 检测灵敏度亚硫酸氢盐处理核苷酸序列甲基化状态生物标记物多个基因发明试剂实验测试甲基化检出率靶点筛查引物肺癌生物技术优化改进
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【权利要求书】：

1.一种用于肺癌检测的DNA甲基化qPCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒通过检测或测量受试样品DNA中一种或多种特定基因的甲基化状态或水平来筛查和诊断肺癌，所述试剂盒中包含下述组成部分：

(1)用于检测SHOX2基因甲基化状态的特异性引物和探针选自下述三种特异性引物和探针组合中的任一种：特异性引物SEQ ID NO:1-2和探针SEQ ID NO:3、特异性引物SEQ IDNO:4-5和探针SEQ ID NO:6、特异性引物SEQ ID NO:7-8和探针SEQ ID NO:9；

(2)用于检测SOX17基因甲基化状态的特异性引物和探针选自下述三种特异性引物和探针组合中的任一种：特异性引物SEQ ID NO:10-11和探针SEQ ID NO:12、特异性引物SEQID NO:13-14和探针SEQ ID NO:15、特异性引物SEQ ID NO:16-17和探针SEQ ID NO:18；

(3)用于检测ACTB基因甲基化状态的特异性引物SEQ ID NO:19-20和探针SEQ ID NO:21。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述特异性引物SEQ ID NO:1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20均经过硫代磷酸酯修饰，且在严格条件下与甲基化或非甲基化的目标基因区域杂交。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述探针SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21是基于TaqManTM设计的，且在严格条件下与甲基化或非甲基化的目标基因区域杂交。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：SHOX2基因探针SEQ ID NO:3、6、9核苷酸序列5’端标记FAM，3’端标记QSY；SOX17基因探针SEQ ID NO:12、15、18核苷酸序列5’端标记Cy5，3’端标记3IAbRQSp；ACTB基因探针SEQ ID NO:21核苷酸序列5’端标记VIC，3’端标记MGBNFQ。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述特异性引物SEQ ID NO:1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20和所述探针SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21的长度为10-50nt。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包含下述组成部分：dNTP混合溶液、MgCl₂溶液、DNA聚合酶、PCR反应缓冲液、PCR去离子水。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包含下述组成部分：血浆游离DNA提取试剂和血浆游离DNA甲基化转化试剂。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其中所述血浆游离DNA甲基化转化试剂为亚硫酸氢盐。

9.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述受试样品DNA为完整基因组、无细胞DNA或循环肿瘤DNA。

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