[发明专利]用于检测人MTHFR基因分型的引物探针组合物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.用于检测人MTHFR基因分型的引物探针组合物，其特征在于，包括：用于检测待检样品中MTHFR基因分型的特异性引物和特异性探针，内参试剂；

所述特异性引物包括：(a)用于检测MTHFR的A1298C位点且核苷酸序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的引物，(b)用于检测MTHFR的C667T位点且核苷酸序列为SEQ ID NO.8和SEQID NO.9的引物；

所述特异性探针包括：(c)用于检测MTHFR的A1298C位点且核苷酸序列为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的探针，(c)用于检测MTHFR的C667T位点且核苷酸序列为SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的探针。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述内参试剂由内参引物及内参探针组成；

内参引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，所述内参探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.7，所述内参探针的5’端标记荧光报告基团CY5；

所述SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团；所述SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团；所述荧光报告基团为FAM或者VIC，所述荧光淬灭基团为MGB或者BHQ。

3.用于检测人MTHFR基因分型的试剂盒，其特征在于，包括：

扩增预混液，用于检测MTHFR的A1298C位点的第一PCR检测试剂，用于检测MTHFR的C667T位点的第二PCR检测试剂，Taq酶，阴性质控样品及阳性质控样品；

所述第一PCR检测试剂含有核苷酸序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的引物、SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4的探针及内参试剂；

所述第二PCR检测试剂含有核苷酸序列为SEQ ID NO.8和SEQ IDNO.9的引物、SEQ IDNO.10和SEQ ID NO.11的探针及内参试剂；

内参试剂由内参引物及内参探针组成；

内参引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，所述内参探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.7，所述内参探针的5’端标记荧光报告基团CY5；

所述SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团；所述荧光报告基团为FAM或者VIC，所述荧光淬灭基团为MGB或者BHQ。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增预混液由PCR缓冲液、dNTPs及MgCl₂组成，

所述阴性质控样品为TE缓冲液，所述阳性质控品为杂合质粒；

所述杂合质粒由1298-Z质粒与667-Z质粒组成；

所述1298-Z质粒具SEQ ID NO.12所示核苷酸序列；

所述667-Z质粒具SEQ ID NO.13所示核苷酸序列。

5.一种检测人MTHFR基因分型的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤(1)提取生物检材样本；

步骤(2)自生物检材样本中提取样本DNA，调整样本DNA至标准纯度与标准浓度；

步骤(3)将样本DNA、阴性质控样品及阳性质控样品分别加入如权利要求3或者4所述的试剂盒中对应的PCR反应管中，执行PCR扩增反应；

步骤(4)检测结果分析。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中的生物检材样本为人体新鲜血液；

所述步骤(2)中自生物检材样本中提取样本DNA具体为：选用血液DNA提取试剂盒进行提取，并使用紫外分光光度计测定样本DNA的纯度。