[发明专利]用于检测人MTHFR基因分型的引物探针组合物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种用于检测人MTHFR基因分型的引物探针组合物、试剂盒及检测方法，该引物探针组合物包括用于检测待检样品中MTHFR基因分型的特异性引物和特异性探针，内参试剂。在本发明中，可利用荧光标记探针结合多重qPCR的方法，具有灵敏度高，专一性强，MTHFR基因的基因分型检测可在同一块96孔板中进行，操作简单，能有效区分MTHFR基因的多态型别，即突变位点A1298C与突变位点C677T，具有检测稳定、快速和特异性高的特点，且检测成本较低。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，尤其涉及一种用于检测人MTHFR基因分型的引物探针组合物、试剂盒及检测方法。

背景技术

叶酸属B族维生素，是合成核酸所必须的元素，是细胞生长和组织修复所必需的物质，更是胚胎发育过程中不可缺少的营养素。叶酸的临床功能除了预防胎儿神经管缺陷外，还能降低孕妇妊娠高血压、自发性流产和胎儿宫内发育迟缓、早产以及新生儿低出生体重等发病率。近年来大量研究已经证实，叶酸缺乏是导致出生缺陷的主要原因。

导致机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传(基因)缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下(叶酸代谢通路障碍)。科学研究证明，通过基因检测技术手段，对人体MTHFR基因及MTRR基因做检测，可以及早发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，从而筛查出容易引起叶酸缺乏的高危人群，实现个性化增补叶酸，即因人而异地确切给出叶酸补充计划和补充量，从而增强叶酸补充依从性，同时加强产前检查，以降低新生儿出生缺陷风险。

与甲基类维生素(叶酸及维生素B12)代谢密切相关的基因是MTHFR和MTRR。5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)等基因变异引起的相应的酶活性降低可阻抑同型半胱氨酸转化为甲硫氨酸，导致低叶酸血症和高同型半胱氨酸血症，从而增加新生儿出生缺陷风险或自发性流产等风险。其中，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)可介导产生5-甲基四氢叶酸，参与叶酸的代谢。MTHFR基因具有多个基因多态性位点，其中最具临床意义的突变位点是C677T和A1298C。若A1298C突变，将会影响该酶的活性从而影响到叶酸的代谢途径，若C677T突变能够使亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)热稳定性及活性下降30％，影响人体中叶酸的代谢平衡，继而直接影响叶酸的用量。MTHFR基因突变检测能指导突变人群及时补充叶酸的摄入量，预防新生儿缺陷及其他疾病的发生。

目前对于基因突变的检测方法普遍应用的仍为DNA直接测序，它是检测各种基因突变的金标准，但是由于其耗时长，成本高，越来越多的基因突变检测方法不断涌现，如高分辨熔解曲线法(HRM)，限制性酶切片段长度多态性分析法(RFLP)，单链构象多态性分析(SSCP)以及TaqMan系统等，每种方法都有其独特的优点或不足。

有鉴于此，有必要对现有技术中的用于检测人MTHFR基因分型的引物探针组合物及相关技术予以改进，以解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于揭示一种用于检测人MTHFR基因分型的引物探针组合物、试剂盒及检测方法，用以实现对MTHFR所形成的突变位点A1298C与突变位点C677T的高效、简便及特异性检测，并降低基因分型的检测成本，为孕妇合理补充叶酸提供准确的医学数据。

为实现上述第一个发明目的，本发明提供了一种用于检测人MTHFR基因分型的引物探针组合物，包括：用于检测待检样品中MTHFR基因分型的特异性引物和特异性探针，内参试剂；

所述特异性引物包括：(a)用于检测MTHFR的A1298C位点且核苷酸序列为SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2的引物，(b)用于检测MTHFR的C667T位点且核苷酸序列为SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9的引物；