[发明专利]结合多交叉置换扩增和金纳米检测肺炎链球菌的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及结合多交叉置换扩增和金纳米检测肺炎链球菌的方法，本发明提供的一种结合多交叉置换扩增和金纳米检测肺炎链球菌的方法，所述多交叉置换扩增MCDA中，含有多条引物，用以识别目标基因片段靶序列的多个区域，并对所述目标基因片段进行所述MCDA反应；在所述扩增引物C1的5’端标记半抗原荧光素，在所述扩增引物D1的5’端标记生物素，获得新标记的扩增引物C1*和D1*；采用所述扩增引物C1*和D1*，在Bst DNA聚合酶、链置换活性DNA聚合酶、其余引物存在下，使用所述目标基因片段作为模板恒温扩增DNA，获得含半抗原荧光素和生物素标记的双标MCDA基因片段；以所述双标MCDA基因片段作为检测物，采用金纳米检测方法对肺炎链球菌进行检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及结合多交叉置换扩增和金纳米检测肺炎链球菌的方法。

背景技术

核酸检测，即核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段，从而筛查特定基因的检测技术，核酸扩增技术包括PCR扩增技术、恒温扩增技术等，恒温扩增技术相较PCR及其衍生技术而言，具有不依赖于热循环扩增设备，整个扩增过程恒定在固定的温度，反应速度快，敏感性强，特异性高等特点，有利于实现快速扩增，便捷检测及现场诊断。目前，应用较为广泛的恒温扩增技术有滚环扩增(RCA)、链置换扩增(SDA)、解旋酶依赖的恒温扩增(HDA)、环介导恒温扩增(LAMP)及交叉扩增(CPA)等，检测时存在不够便捷、快速、敏感、特异的问题。

发明内容

鉴于上述问题，提出了本发明以便提供一种克服上述问题或者至少部分地解决上述问题的结合多交叉置换扩增和金纳米检测肺炎链球菌的方法。

本发明实施例中提供一种结合多交叉置换扩增和金纳米检测肺炎链球菌的方法(MCDA-LFB)，所述多交叉置换扩增MCDA中，含有多条引物，用以识别目标基因片段靶序列的多个区域，并对所述目标基因片段进行所述MCDA反应；所述多条引物包括：一对交叉引物、一对置换引物、6条扩增引物，所述扩增引物包括扩增引物C1和D1，

在所述扩增引物C1的5’端标记半抗原荧光素，在所述扩增引物D1的5’端标记生物素，获得新标记的扩增引物C1*和D1*；

采用所述扩增引物C1*和D1*，在Bst DNA聚合酶、链置换活性DNA聚合酶、其余引物存在下，使用所述目标基因片段作为模板恒温扩增DNA，获得含半抗原荧光素和生物素标记的双标MCDA基因片段；所述其余引物为除所述扩增引物C1*和D1*外的所述多条引物；

以所述双标MCDA基因片段作为检测物，采用金纳米检测方法对肺炎链球菌进行检测。

进一步的，所述MCDA反应中，所述目标基因片段模板浓度为10fg-10ng。

进一步的，所述MCDA反应中，所述反应温度为恒温，且温度范围为62-67℃。

进一步的，所述温度为65℃。

进一步的，进行所述检测时，依次将所述检测物、检测缓冲液滴加在所述检测器具表面。

进一步的，所述检测物与所述检测缓冲液用量体积比为1∶600。

进一步的，所述检测器具的组成部件包括：样品垫、金标垫、纤维膜、吸水垫及背板，所述样品垫、金标垫、纤维膜、吸水垫、背板按从上至下依次进行设置；所述金标垫中物质包括如下之一：金纳米粒子偶联的链霉素亲和素SA-G、抗异硫氰酸荧光素抗体anti-FITC、生物素偶联的牛血清蛋白B-BSA。

进一步的，所述引物选自下列序列组合：