[发明专利]一种p16免疫组化检测试剂盒

权利要求书

1.一种p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒中包括以下试剂：

一抗：冻干粉p16抗体；

无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂10－15ml；

试剂A：免疫组化封闭液；

试剂B：生物素标记二抗工作液；

试剂C：辣根酶标记链酶卵白素工作液；

棕色显色液D液1－2ml；

白色显色液E液20－25ml；

0.1MPBS缓冲液；

柠檬酸钠抗原修复液；

二氨基联本胺DAB染色液。

2.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒的实验步骤具体如下：

S1：制备一抗稀释液和DAB显色液；

S2：将石蜡切片，并进行脱蜡至水；

S3：蒸馏水冲洗，0.1MPBS缓冲液浸泡6－10min；

S4：进行抗原修复；

S5：采用3％－5％的无色双羊水去离子水孵育15－20min，消除内源性过氧物酶活性；

S6：滴加蓝色试剂A免疫组化封闭液，室温孵育15－20min；

S7：滴加S1中制备的一抗稀释液，35－37℃孵育2－3小时；

S8：采用0.1MPBS缓冲液冲洗，每一分钟冲洗一次，三分钟冲洗三次，之后滴加黄色试剂B生物素标记二抗工作液，30－37℃孵育15－20min；

S9：采用0.1MPBS缓冲液冲洗，每一分钟冲洗一次，三分钟冲洗三次，之后滴加橙色试剂C辣根酶标记链酶卵白素工作液，30－37℃孵育15－20min；

S10：通过DAB显色液显色，并通过自来水充分冲洗；

S11：进行复染、脱水、透明，之后选择适当的封片剂封片。

3.根据权利要求2所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述一抗稀释采用以下两种方法进行稀释：

(1)将冻干粉p16抗体用0.1MPBS缓冲液稀释，将稀释后的抗体分装5－10支，20ulx5支或10ulx10支，放入－20℃保存；

(2)将冻干粉p16抗体用0.1MPBS缓冲液稀释50ul成原液，再加50％甘油，放入－20℃保存。

4.根据权利要求2所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述柠檬酸钠抗原修复液的修复方法包括沸水浴修复、微波修复或高压修复。

5.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述DAB显色液的制备实验具体包括如下步骤：将1ml的白色显色液E液作为DAB底物液，之后加入1滴50ul的棕色显色液D液作为DAB浓缩液，混合均匀，制得DAB显色液。

6.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述免疫组化封闭液包括封闭用正常山羊血清工作液。

7.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述生物素标记二抗工作液采用生物素标记羊抗兔免疫球蛋白G、生物素标记山羊抗小鼠免疫球蛋白G或生物素标记羊抗兔、大鼠、小鼠和豚鼠免疫球蛋白G。

8.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述PBS缓冲液的酸碱度为pH7.2－7.4。

9.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述PBS缓冲液也可采用无菌蒸馏水。